synphilin1寡核苷酸对6羟多巴胺诱导帕金森病大鼠黑质caspase3表达影响

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1、Synphilin1寡核苷酸对6羟多巴胺诱导帕金森病大鼠黑质Caspase3表达影响：张鲲鹏于永鹏谢安木【摘要】目的观察Synphilin1寡核苷酸对6羟多巴注(6OHDA)诱导的帕金森病(PD)大鼠黑质Caspase3蛋白表达的影响，从而探讨Synphilin1在帕金森病发病机制中的作用。方法ethodsSixtyICON公司产品)与Caspase3(1∶100，中国武汉博士德公司产品)。每个标本在高倍镜(200倍)下观察，随机取5个视野，采用德国KONTRONIBAS2.0全自动图像分析系统，分别计数Synphilin1、Caspase3阳性细胞数。　　1.3统

2、计学处理　　测定数据以±s表示，采用SPSS11.5及PPMS1.5统计学软件[10]对数据进行单因素方差分析及组间SNKq检验。　　2结果　　2.1实验动物数量分析　　纳入研究的大鼠60只，因造模过程中死亡16只，进入结果分析44只，其中假手术组10只，PD组9只，反义组8只，正义组9只，错义组8只。　　2.2大鼠旋转行为检测　　大鼠腹腔注射APO(0.5mg/kg)20min后开始记录，共记录30min，除假手术组无定向旋转外，PD组、反义组、正义组及错义组平均转速分别为(168±31)、(102±25)、(166±18)、(146±17)r，PD组和反义组比较差异具有显著意义(F

3、=13.1，q=7.95，P<0.01)。　　2.3各组大鼠黑质Synphilin1的表达　　各组都检测到了Synphilin1的表达，该蛋白表达部位在黑质神经细胞的胞浆。与假手术组比较，PD组大鼠黑质Synphilin1表达量显著增多，两者比较差异有显著性(F=16.6，q=4.21，P<0.05)。与PD组比较，反义组大鼠黑质Synphilin1表达量显著减少，两者比较差异有显著意义(q=5.43，P<0.01)，而正义组、错义组大鼠黑质Synphilin1表达量未见明显减少，与模型组比较无统计学意义(q=3.31、3.52，P>0.05)。见表1。

4、　　2.4各组大鼠黑质Caspase3的表达　　各组都检测到了Caspase3的表达，该蛋白表达部位在黑质神经细胞的胞浆。与假手术组比较，PD组大鼠黑质Caspase3的表达量显著增多，两者比较差异有显著性(F=9.4，q=6.79，P<0.01);与PD组比较，反义组大鼠黑质Caspase3的表达量显著减少，两者比较差异有显著意义(q=4.92，P<0.01);而正义组、错义组大鼠黑质Caspase3的表达量未见明显减少，与PD组比较差异无统计学意义(q=0.48，q=0.76，P>0.05)。见表1。表1各组大鼠黑质Synphilin1、Caspase

5、3阳性细胞数比较3讨论　　6OHDA是一种去甲肾上腺素同系物，能通过氧化应激反应损伤抑制线粒体呼吸链复合物Ⅰ和Ⅳ活性，从而导致细胞变性死亡。1968年UNGERSTEDT[11]首先采用6OHDA制备大白鼠PD动物模型，该模型的某些特点和人类PD相似。研究证实，黑质纹状体系统的损毁程度与APO诱导后大鼠的旋转圈数呈正相关[12]。因此，旋转行为的出现和频率大小，是鉴定模型成功、毁损程度和衡量治疗效果的一个重要指标[13]。本实验结果显示，反义组大鼠平均转速较PD组明显降低，旋转的周径增大，这可能与多巴胺能神经元损伤程度较轻有关。利用Synphilin1反义寡核苷酸抑制6OHDA诱

6、导的PD大鼠黑质Synphilin1蛋白的表达后，黑质TH表达明显增多也支持这一点[14]。说明Synphilin1反义寡核苷酸对PD大鼠旋转行为有明显的改善作用，这种改善作用与Synphilin1的表达抑制有关，提示阻断Synphilin1的表达具有神经保护作用。为了进一步探讨该保护作用的机制，在本实验中我们探讨了Synphilin1寡核苷酸对大鼠黑质Caspase3表达的影响。Caspase3是Caspase家族一类重要的细胞凋亡蛋白酶之一，目前发现的Caspase家族蛋白酶共有14种，在细胞凋亡的执行过程中起关键作用，决定着细胞凋亡的形态改变和生物化学改变。已有研究

7、表明，Caspase2、3、7、10和14在细胞凋亡过程中起主要作用[15]。本研究结果表明，PD组大鼠黑质Synphilin1、Caspase3表达明显增多，而反义组大鼠黑质Synphilin1、Caspase3表达却明显减少，与PD组比较差异有显著性(P<0.01)，正义组和错义组没有见到这种变化。说明反义寡核苷酸对Synphilin1表达的抑制是有效的[7]，阻断Synphilin1表达可以明显降低PD大鼠黑