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《奥沙利铂对人宫颈癌hela细胞株的体外作用》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在应用文档-天天文库。
1、奥沙利铂对人宫颈癌HeLa细胞株的体外作用【摘要】【目的】研究奥沙利铂对人宫颈癌HeLa细胞株的生长抑制作用及对Caspase-3活性的影响。【方法】用人宫颈癌HeLa细胞株经奥沙利铂处理后，MTT法测定细胞生长抑制率,透射电镜观察细胞形态学变化,流式细胞仪和原位末端标记技术法（TUNEL）检测细胞凋亡率，比色法检测Caspase-3活性变化，,并利用AC-DEVD-CHO进行Caspase-3抑制试验。【结果】奥沙利铂(4～64μmol/L)在体外能以时间和剂量依赖的方式对宫颈癌HeLa细胞产生细胞毒作用并诱导其凋亡，奥沙利铂作用细胞株48h后,细胞呈现典型的凋亡细胞的形态特征；并能增加He
2、La细胞的Caspase-3活性，AC-DEVD-乙醛(AC-DEVD-CHO)可有效抑制奥沙利铂诱导的HeLa细胞凋亡。【结论】奥沙利铂在体外能抑制人宫颈癌HeLa细胞的增殖,诱导细胞凋亡，Caspase-3活化参与了奥沙利铂诱导HeLa细胞的凋亡过程。【关键词】宫颈癌；奥沙利铂；生长抑制；Caspase-3Abstract：【Objective】TostudytheeffectofoxaliplatinongroancervicalcancerHeLacells.【Methods】HumancervicalcarcinomaHeLacellsinedorphologicchangesine
3、dunderelectronmicroscopy.FloetryandTUNELinecellapoptosisrate.Activitiesofcaspase-3inedbychromometry,anditsinhibitionol/L)inducedcytotoxicityandapoptosistohumancervicalcarcinomaHeLacellsinvitroistime-dependentanddose-dependent.Thetypicalapoptoticmorphologicalfeaturesappearedinthecellstreatedaandinduc
4、eapoptosisinvitro.Caspase3activationmaybeinvolvedinoxaliplatin-inducedapoptosisofHeLacells.Keya;oxaliplatin;cellgroa公司产品,用PBS配成5mg/mL。RPMI-1640培养液为GIBCO产品。胎牛血清:杭州四季青生物制品厂产品。原位末端转移酶标记法(TUNEL)试剂盒(武汉博士德公司),EPICSXL型流式细胞仪(BeckmanCoulter公司)，Caspase-3试剂盒购自凯基生物工程公司。Caspase-3阻断剂AC-DEVD-CHO购自PharMingen公司。1.2细
5、胞培养将HeLa细胞培养于含100mL/L胎牛血清的RPMI-1640培养基中（内含谷氨酰胺及100万U/L青霉素和链霉素），置37℃、体积分数5%CO2饱和湿度下培养,每2～3d传代1次,取对数生长期细胞用于实验。1.3MTT实验采用MTT比色法,取对数生长期HeLa细胞（5×105/mL），24h待大部分帖壁后分别加入不同浓度的奥沙利铂（2μmol/L、4μmol/L、8μmol/L、16μmol/L、32μmol/L、64μmol/L、128μmol/L、256μmol/L）,继续培养24ｈ、48ｈ和72ｈ,细胞对照组每孔加入20μL培养液;空白对照组在铺孔时不加细胞悬液,只加200μL
6、培养液。每个浓度各设3个平行孔,置37℃、5%CO2培养箱中分别培养后,加入5mg/mLMTT20μL,继续温育4h后吸弃上清,加入二甲基亚砜(DMSO)150μL,振荡10min后,用自动酶标读数仪在波长490nm处测定各孔A值。实验重复3次,取3次实验结果的平均值作为实验结果。按下列公式计算肿瘤细胞增殖抑制率:肿瘤细胞增殖抑制率=（对照组吸光度A均值-实验组吸光度A均值/对照组吸光度A均值）×100%。1.4电子显微镜观察细胞形态取对数生长期HeLa细胞分别加入2个100mL培养瓶中,使每瓶细胞数为1×106个。1瓶为阴性对照,另1瓶加入奥沙利铂后最终浓度32μmol/L,于37℃、体积分
7、数5%CO2条件下培养48h,调整经胰蛋白酶消化后的细胞浓度至106/mL，加入20g/L戊二醛固定后，由电镜室按常规制备标本，在透射电镜下观察细胞形态并摄片。1.5原位末端标记技术(TUNEL)检测细胞凋亡分组：对照组,草酸铂作用组(8μmol/L、16μmol/L、32μmol/L、64μmol/L),每孔设4个复孔。把1×106/mL的HeLa细胞分别接种于24孔板中，同时在每个孔中放置载玻
