皮肤用药毒性试验

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1、皮肤急性毒性试验一.试验目的观察动物完整皮肤及破损皮肤短期内接触受试物所产生的毒性反应。二.实验材料1.动物：选用成年健康家兔(2kg)、白色豚鼠(300g)、白色小型猪(7kg)或大鼠(200g)。家兔或小型猪每组4只，豚鼠或大鼠每组10只。受试动物应皮肤光滑、无损伤、无皮肤病。2.受试物：膏剂、液体或粉末。前两者可直接试验，后者需用适宜赋形剂(如羊毛脂、凡士林等)混匀，以保证受试物与皮肤良好接触。三试验方法1受试动物皮肤制备：①完整皮肤制备：动物在给药前24h，将背部脊柱两侧去毛，可采用剪、剃或适宜的脱毛剂，如8%Na2S等。去毛范围约相当于体表面积的10%左右，即家兔

2、约150cm2左右，豚鼠、大鼠约40cm2左右，小型猪约300cm2。去毛后24小时检查去毛皮肤是否因去毛而受伤，受伤的皮肤不宜做完好皮肤的毒性试验。②破损皮肤准备：按上述方法将受试动物去毛，消毒皮肤后，用消毒手术刀做井字形划破表皮，或用砂布纸摩擦打毛皮肤等，以皮肤出现轻度渗血为度。2剂量选择和分组：分对照组和试验组。对照组应设赋形剂组或空白组。试验组分为完整皮肤组和破损皮肤组，各2～3个剂量组。每组动物数为家兔或小型猪4只，大鼠或豚鼠10只，雌雄各半。低剂量组以临床用制剂(含辅料)用量不低于1g或1ml，高剂量组为低剂量组的2～4倍，或各剂量组间间距根据受试物毒性大小和预

3、试结果而定，一般以0.65～0.85为宜。根据中药具体特点，可以提高浓度或增加24小时内用药次数。若用受试物剂量超过有效浓度20倍以上，仍未出现异常反应或死亡，则只设一个高剂量组3给药方法及观察时间：试验时，将受试物均匀的涂敷于动物背部脱毛区，破损皮肤则在脱毛区划破皮肤后再涂敷受试物，并用无刺激性砂布、胶布或网孔尼龙绷带加以固定。给受试物24小时后，可用温水或适当溶剂去除残留的受试物或赋形剂，每日观察，连续观察7天。给受试物时应注意，若受试物是固体粉末或中药散剂，则需加适量水或赋形剂(如羊毛脂、凡士林、橄榄油等)混匀，以保证受试物与皮肤的良好接触。如受试物时液体，除用纱布固

4、定外，还应在其覆以聚乙烯薄膜，然后再包扎固定，以防止液体挥发。给药后，要防止动物舔食受试物。4.观察内容：观察动物全身中毒表现和死亡情况，包括动物体重、皮肤、毛发、眼睛和粘膜的变化，呼吸、循环、中枢神经系统、四肢活动等的变化。若有动物死亡则需进行尸检和肉眼观察。当有肉眼可见病变时，则需进行病理学检查。四结果判断及实验报告实验结果与对照组比较进行判断。试验报告应详细论述实验方法，列表说明分组、剂量、动物数、每日用药次数、中毒表现及死亡动物数，有死亡动物时，应报告病例解剖学及病理组织学检验报告，并与对照组进行对比评价。皮肤长期毒性试验一.试验目的：观察动物完整皮肤及破损皮肤长期

5、接触受试物，经皮肤渗透对机体产生的异常反应和反应的可逆程度。外用药治疗局部疾患的，方中不含毒性药材和毒性成分的，可不做长期毒性试验。但需做局部刺激试验、过敏试验，必要时还需做吸收试验。二.实验材料1.动物：选用成年健康家兔、豚鼠或大鼠，雌雄各半。家兔体重2kg、豚鼠300g、大鼠200g左右为宜。家兔每组6只，豚鼠、大鼠每组10只2.受试物：受试物是膏剂或液体者可直接试验，若受试物是固体粉末(如中药散剂等)，则需要适量水或适量赋形剂(羊毛脂、凡士林、橄榄油等)混匀，以保证受试物与皮肤的良好接触。三.试验方法1.受试动物皮肤准备：包括完整皮肤准备和破损皮肤准备，可参见皮肤急性

6、毒性试验。2.剂量选择和分组：分对照组和实验组。对照组对照组应设赋形剂组或空白组。试验组分为完整皮肤组和破损皮肤组，各2～3个剂量组。各剂量在要求同大鼠口服长期毒性试验，即皮肤给药的高级连贵族应是使动物产生严重毒性反应或有少数动物死亡的伎俩，低剂量组应相当或略高于药效学的有效伎俩。若受试物剂量超过有效弄苏20倍以上，仍未见动物有不良反应及死亡时，则须设一个高剂量组。每组动物数为家兔4只，大鼠或豚鼠10只，雌雄各半。3.给药方法及时间：将受试物均匀涂敷于动物背部脱毛区，参见皮肤剂型毒性试验方法固定，每日一次，每次至少接触6小时，按临床用药疗程的2～4倍时间连续给药。若出现毒性

7、反应，部分动物应于停药后继续观察1～2周，以便确定受试物可逆反应程度。4.检测项目：①每日观察皮肤状况、动物体重、全身症状；②皮肤病理学检查：在最后一次给药后24h，或恢复性观察结束时，每只动物取受试物涂抹的局部皮肤做病理组织学检查；③血液学、血液生化指标、系统尸解和病理组织学检测：方法及检查项目均同大鼠长期毒性试验要求。5.皮肤吸收试验：一类新药，以及凡处方中有有毒药材，而其毒性成分已知者，如生马钱子(士的宁)、生乌头、生附子(乌头碱)，应做皮肤吸收试验。6.结果判断：实验结果应写明安全剂量、中毒剂量、中毒表现、