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《国内外布病检测技术与蛋白抗原的筛选研究进展综述》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在应用文档-天天文库。
1、国内外布病检测技术与蛋白抗原的筛选研究进展综述 布鲁氏菌病(简称布病)是一种重要的人畜共患病,也是引起动物繁殖障碍的主要疾病之一。临诊上动物以流产、胎盘炎、附睾和睾丸炎为主要特征;人群感染多呈慢性型,以全身乏力、多个组织器官受损为主要表现。近年来,我国人、畜间布病呈高发态势,严重威胁畜牧业发展和人群身体健康,被列为国家中长期动物疫病防治规划(20122020年)的三大疾病(口蹄疫、高致病禽流感和布病)之一。同时,该病在国际上也被列为重要的生物恐怖战剂之一。一直以来,动物群布病的净化困扰着世界各国政府,许多发达国家不惜成本、历时数十年,通过检疫、阳性动物扑杀-补偿等措施,先后实现了家畜布病
2、净化目标。在我国,牛、羊饲养密度相对较高,动物基数大、阳性动物比例高,控制布病主要通过疫苗免疫与检测诊断相结合的方法。理论上,疫苗免疫可以提高动物群对布病的抵抗力,控制疫病的蔓延;检测诊断除可以监测疫苗免疫状态和效果外,还能及时对自然感染动物进行识别,对布病的净化起到促进作用。但是,现有布病疫苗免疫在一定程度上阻止布病蔓延的同时也给布病检测技术提出挑战。现有布病检测技术不能区分疫苗接种与自然感染动物,致使免疫群内患病动物仍然存在带菌、排菌现象,病原扩散蔓延造成的疫情状态难以消除,时刻威胁着公共卫生安全。因此,迫切需要简单、快速、准确、能鉴别诊断的布病检测技术。针对布病诊断和检测技术的研究一
3、直在进行,笔者对当前国内外布病检测技术的研究现状和蛋白抗原的筛选进展进行概述,旨在促进我国布病检测技术的多元化、多用途,尽快推进布病检测技术的研究进程。 1、病原学检测方法 1.1细菌学方法 迄今,细菌学方法依然是病原诊断的主要方法,包括样品涂片显微镜检和细菌分离培养、鉴定。虽然检出率很低,但却是布病诊断的金标准。在此方面,高敏感选择性培养基及病料样品采集的及时性和处理设备的有效使用直接影响检测结果。针对不同临床病例,应采集合适的病料样品,如流产的胎儿通常采集的样品是胃内容物、肺脏和脾脏;成年动物的样品是胎盘、胎膜、阴道分泌物、奶样、精液和关节液等;死亡动物尸体优先选择的组织为乳腺、
4、颌下、腮腺、肩前、髂内淋巴结和脾脏等。上述所有的样品采集时必须独立包装,并冷藏后立即运送到实验室或者暂时冻存于防漏的冷冻容器内。此外,急性期病人的血液也是较为常用的细菌分离用样品。 1.2分子生物学方法 近年来,分子生物学技术得到快速发展和广泛应用,被逐渐应用于疾病的诊断和其他研究领域,开辟了布病临床诊断和检测的新途径。分子生物学技术在布病诊断中的应用,也经历了从传统PCR到荧光定量PCR再到环介导等温扩增技术(LAMP)的发展历程。 1992年,Baily等根据bcsp31基因设计引物B4/B5,建立了一种布鲁氏菌属特异性的PCR检测方法。该对引物一直沿用至今,且是目前检测布鲁氏菌
5、应用最广的引物对之一。 1994年,Bricker等基于插入序列IS711在不同种型布鲁氏菌基因组中的多态性,针对牛种、羊种、猪种和绵羊附睾种布鲁氏菌设计了不同的引物,来鉴定和区分牛种布鲁氏菌生物1型、2型和4型、羊种布鲁氏菌、绵羊附睾种布鲁氏菌和猪种生物1型,建立了AMOS-PCR方法。另外,钟旗等也应用AMOS-PCR开展了布鲁氏菌种、型鉴定研究,结果表明该方法的特异性、敏感性均高于细菌分离和血清学诊断方法,且能区分布鲁氏菌各个种和部分生物型。 除传统PCR技术外,实时荧光定量PCR(Real-timePCR)是新近发展的PCR技术。 2001年,Redkar等应用Real-ti
6、mePCR鉴别了牛、羊、猪种布鲁氏菌。 Probert等根据bcsp31基因设计引物,使用多重荧光定量PCR方法对122株布鲁氏菌进行鉴别,证实该方法可以在2~3h内对不同种的布鲁氏菌进行快速、敏感、准确地鉴别。 LAMP扩增方法是一种灵敏性比较高的检测方法,其灵敏性比传统PCR高出10~1000倍,达到甚至高于荧光定量PCR的检测水平。2011年,许邹亮等根据布鲁氏菌omp25基因设计引物,建立的基于颜色判定的布鲁氏菌LAMP检测方法可以检出浓度低至17fg的布鲁氏菌基因组DNA,灵敏性较高;且具有检测特异、设备要求简单等特点,适用于基层兽医部门进行布鲁氏菌的快速检测。 布鲁氏菌分
7、子生物学检测技术依赖于特异性诊断用基因。截止目前,已筛选出多个具有布鲁氏菌属特异性的基因,包括IS711遗传片段、16SrRNA、31和4ku外膜蛋白编码序列、bcsp31、omp2、bp26和per等,此外几乎所有的临床样品如全血、血清、白细胞、组织块、乳汁、关节滑液、阴道拭子、精液、尿液和石蜡切片等均可作为PCR方法的检测对象。总的来说,基于PCR技术形成的布鲁氏菌分子生物学检测方法比细菌学方法简单、快速、实用,并且
