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1、妇科腹腔镜手术患者采用七氟烷麻醉的疗效分析 七氟醚于1968年由Regan合成,1986年完成3期临床试验,1990年首先由日本的药监部门批准临床使用。近年来,被许多著名麻醉学专家誉为吸入麻醉的里程碑式药物。研究表明,七氟醚可抑制结肠癌细胞和喉癌细胞的生长,以及肺癌细胞的黏附。但七氟醚对人乳腺癌细胞株黏附能力的影响尚未见报道。 CD44是一种细胞表面跨膜糖蛋白,属于黏附分子,其分布十分广泛,功能主要参与细胞间及细胞与基质间的特异性粘连过程,且在恶性肿瘤的发生、发展中起着十分重要的作用。目前,CD44作为多种已知肿瘤干细胞的标记物,包括乳腺癌、胰腺癌、前列腺癌、结直肠癌、肝
2、细胞癌。 CD44参与了这些肿瘤的发生、发展、复发和转移的过程。本研究拟评价七氟醚对人乳腺癌细胞株MCF-7黏附能力、CD44表达的影响。 1、材料与方法 1.1主要试剂与仪器 人乳腺癌细胞株MCF-7(南华大学研究所),1640培养基、10%胎牛血清(Hyclone公司,美国),麻醉气体监测仪(DatexAS/3公司,芬兰),AestivaR/5型麻醉机(DatexOhmeda公司,芬兰)。 1.2方法 1.2.1细胞培养。MCF-7细胞用含10%胎牛血清的RPMI1640培养基于37℃、5%CO2、饱和湿度培养箱中培养。 1.2.2实验分组与处理。取对数生长
3、期的人乳腺癌MCF-7细胞,采用随机数字表法,将其随机分为4组:不经任何处理的Control组、1.7%七氟醚作用的Treat1组、3.4%七氟醚作用的Treat2组和5.1%七氟醚作用的Treat3组。 1.2.3细胞黏附实验。分别处理好细胞将100μL细胞悬液加入96孔板中,继续培养1h。每孔加入200μL磷酸盐缓冲液(PBS)振摇5min,洗2遍。弃PBS后加入噻唑蓝(MTT),用酶标仪于波长490nm测定吸光度值,并计算黏附率=(各实验孔黏附细胞吸光度值/对照孔黏附细胞吸光度值-1)100%。 1.2.4CD44mRNA表达的测定。采用qRT-PCR法
4、测定CD44mRNA的表达qRT-PCR反应:反应体系为20μL,包括稀释后的RT产物2μL、2qRT-PCR缓冲液10μL、5μmol/LmiR-155特异性PCR引物0.4μL、5U/μL耐热DNA聚合酶0.2μL、灭菌双蒸水7.4μL。反应条件:先95℃3min活化Tag酶;然后95℃12s、62℃35s共40个循环。 1.3统计学处理 采用SPSS16.0软件进行分析,组内比较采用重复测量设计的方差分析,组间比较采用单因素方差分析,以P<0.05为差异有统计学意义。 2、结果 2.1 4组人乳腺癌细胞株MC
5、F-7细胞黏附能力的比较与处理前比较,Treat1组、Treat2组和Treat3组处理2、4和6h细胞黏附率降低(P<0.05);与处理2h比较,Treat2组和Treat3组处理4和6h细胞黏附能力降低(P<0.05);与处理4h比较,Treat2组和Treat3组处理6h细胞黏附能力降低(P<0.05);与Control组比较,Treat1组、Treat2组和Treat3组处理2、4和6h细胞黏附能力降低(P<0.05);与Treat1组比,Treat2组和Treat3组处理2、4和6h细胞黏附能力降低(P<0.05);与Treat2组比,
6、Treat3组处理2、4和6h细胞黏附能力降低(P<0.05),见表1。 2.2 4组人乳腺癌细胞株MCF-7细胞CD44mRNA表达改变与处理前比较,Treat1组、Treat2组和Treat3组处理2、4和6h细胞CD44的mRNA表达下调(P<0.05);与处理2h比较,Treat2组和Treat3组处理4和6h细胞CD44的mR-NA表达下调(P<0.05);与处理4h比较,Treat2组和Treat3组处理6h细胞CD44的mRNA表达下调(P<0.05);与Control组比较,Treat1组、Treat2组和Treat3组处理2、4和6
7、h细胞CD44的mRNA表达下调(P<0.05);与Treat1组比,Treat2组和Treat3组处理2、4和6h细胞CD44的mR-NA表达下调(P<0.05);与Treat2组比,Treat3组处理2、4和6h细胞CD44的mRNA表达下调(P<0.05),见表2。 3、讨论 乳腺癌是女性第一大恶性肿瘤,据美国癌症协会(ACS)2011年数据统计,2008年世界女性乳腺癌新发病例1383500例,占女性全部恶性肿瘤的23%,死亡458400例,其中,大约一半的乳腺癌新发病例和
