hplc法测定盐酸伊伐布雷定片剂中有关物质

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1、HPLC法测定盐酸伊伐布雷定片剂中有关物质【关键词】盐酸伊伐布雷定片；高效液相色谱法；有关物质盐酸伊伐布雷定合成后有异构体存在，分别为R—异构体和S一盐异构体。R—异构体无药理活性，但通过在国内外较多研究资料表明R—异构体在制剂过程中并不发生转换，盐酸伊伐布雷定原料中控制了R-异构体含量，者制剂中不需检测。本文建立的HPLC法测定盐酸伊伐布雷定片有关物质的方法，作为盐酸伊伐布雷定片的质量控制。现将其有关物质测定的研究资料总结如下。1仪器与试药1.1仪器：日本岛津公司:LC-10ATvp输液泵、SPD—10Avp紫外检测

2、器、ANASTAR色谱工作站。1.2检测样品和试药:盐酸伊伐布雷定片(江苏恒瑞医药股份有限公司提供测试样品：090301、090302、090303、090304、090305、090306)，水为超纯水，色谱级乙腈（成都化学试剂厂生产），磷酸盐缓冲液为AR级。2方法与结果2.1色谱条件：　流动相：乙腈—pH7.6磷酸盐缓冲液(30：70—40：60)梯度洗脱(见表1),色谱柱：KromasilC18柱(0.46cm×25cm，5μm)，流速：1.0m/min，检测波长：220nm，柱温：25℃。2.2制备供试品溶液：

3、在同批号样品中取20片盐酸伊伐布雷定片，研细后，精密称定适量药粉，置10ml量瓶中，用流动相溶解并稀释至刻度(含量1mg/ml)，摇匀，滤过，取续滤液，即得。2.3制备对照品溶液：精密吸取供试品溶液1mL，置100mI量瓶中，用流动相稀释制成1％的样品自身对照溶液。2.4最低检测限：分别称取盐酸伊伐布雷定适量，用流动相稀释成系列浓度的溶液，并精密吸取20l，注入色谱仪中。结果表明：进样量为2.03ng时，峰高约变为基线噪音的3倍。故该条件下仪器对其成分的检测灵敏度高。2.5精密度试验：取品供试品溶液连续进样4次，每次2

4、0.0μl，将4次峰面积精密度计算，RSD=0.98%。2.6稳定性实验：　取同一样品液分别在0h、1h、2h、4h、6h、8h进样检测，每次20μl，对所得的6次峰面积进行精密度计算，求得RSD为1.97%，表明样品盐酸伊伐布雷定片中有关物质在8h内稳定。2.7重复性试验：取同批号盐酸伊伐布雷定片20片，研细，按对角分样的原则分成6份，将每份样品按制备供试品溶液的方法制备样品液，进行有关物质测定，并根据线性关系计算有关物质量，样品中有关物质的平均质为0.62％，RSD为1.45％。3讨论盐酸伊伐布雷定片品是首例单纯减

5、缓心率的有效药物，具有特殊降低心率的作用，不良反应小，其耐受性好，长期应用该药能有效改善改善心脏泵血的功能。盐酸伊伐布雷定片剂已在国外有销售，目前在国内尚未有厂家生产销售，是伊伐布雷定的盐酸盐［1］，其化学名：3一(3一［［(7S)(3,4一二甲氧基苯并环丁烷［4.2.0］辛一1,3,5一三烯一7一基)甲基］一甲氨基］丙基)一1,3,4,5一四氢一7,8一二甲氧基一2—氢一3一苯并氮杂卓一2一酮盐酸盐。适用于不耐受或禁用β阻断剂和窦性心律正常的慢性稳定型心绞痛的患者［2］，是第一个选择特异性作用于心脏起搏电流的抑制剂［

6、3］，具有特殊降低心率的作用，其耐受性好，不良反应小，长期应用伊伐布雷定片可有效改善心衰动物左心室的结构和功能、改善心脏泵血的功能。国内外有较多关于检测盐酸伊伐布雷定片有关物质的研究，我们以上采用的HPLC法对其有关物质的检测，采用了流动相梯度洗脱的方法，节约了检测时间，并使各杂质峰都能很好地分离，使检测结果更为准确。计算有关物质的方法：以自身溶液对照法计算杂质的含量。供试品溶液色谱图中若有杂质峰，其最大杂质峰面积不得大于对照液主峰面积的一半，各杂质峰总面积不得大于对照液主峰面积的2倍。其测得有关物质的平均含量为0.6

7、2％，符合制剂中对有关物质的要求。采用高效液相色谱法测定盐酸伊伐布雷定片的有关物质，该方法的重现性、精密度、分离度和稳定性等均符合相关要求，且灵敏度高，可用于盐酸伊伐布雷定片的有关物质控制。