白术茯苓汤不同提取方法对脾虚大鼠血管活性肠肽的影响

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1、白术茯苓汤不同提取方法对脾虚大鼠血管活性肠肽的影响彭腾，贾波，邱建平，李鸿翔，魏华【摘要】目的研究白术茯苓汤不同提取方法对脾虚大鼠血管活性肠肽含量的影响。方法以大黄、厚朴、枳实加饥饱失常法复制脾气虚证动物模型，运用水提取法、水提醇沉法、半仿生法、半仿生提取醇沉法、生物提取法5种方法提取样品分别灌胃给药后观察各组药物对脾虚大鼠肠组织及血浆VIP的影响。结果与模型组比较，水提取法组、半仿生法组均能降低脾虚大鼠VIP水平，其中半仿生法作用更明显。结论中药复方用半仿生法提取值得进一步的探索。【关键词】白术茯苓汤;提取方法;血管活性肠肽　白术茯苓汤由白术、茯

2、苓组成，二药配伍应用，始见于张仲景所著《伤寒杂病论》，明代徐春甫用以专治湿泻，并命名为白术茯苓汤而载入《古今医统大全》。二药均能益气健脾，白术苦温而善于燥湿，茯苓甘淡而善于渗湿，合而用之，一燥一湿，健脾除湿，相辅相成，成为古今治疗脾气虚证及脾虚泻泄的经典小方和常用药对。课题组前期的研究结果表明，白术茯苓汤水煎剂能显著下调SD大鼠脾虚动物血浆中VIP的升高[1，2]。为进一步研究该复方提取方法的药理作用，本课题组采用不同的提取方法系统研究其对脾虚大鼠血管活性肠肽含量的影响。　　1材料　　1.1动物SPE级SD大鼠56只，体质量(180±20)g，雌雄

3、各半。由成都中医药大学实验动物中心提供，合格证号：0016632。　　1.2药品厚朴、枳实、大黄药材购于成都同仁堂，白术、茯苓药材购于成都市中药材公司。　　1.2.1造模药物的制备按厚朴∶枳实∶大黄为3∶3∶2的比例，厚朴、枳实先煎沸，再下大黄共煎，煎液过滤，煎煮两次，合并煎液，浓缩成1g(生药材，下同)/ml煎液，4℃保存，备用。　　1.2.2观察药物的制备白术茯苓汤(下同)水提取法样品制备：称取重量为1∶1的白术、茯苓生药材饮片，混合浸泡30min后合煎，煎煮3次后合并药液，过滤，浓缩成0.25g/ml煎液水提取醇沉淀法提取液样品制备：上述煎液

4、用95%乙醇调节浓度至70%，沉淀过滤，滤液浓缩成0.25g/ml。半仿生法提取液样品制备：参照张兆旺、陈惠结、孙秀梅等的研究[3，4]，结合本课题组的研究结果，称取重量为1∶1的白术、茯苓生药材饮片，加入8倍量的水煎煮3次，3煎用水的pH依次为5.0，7.5，8.5;煎煮时间依次为90，60，60min。合并提取液，过滤、滤液浓缩成0.25g/ml。半仿生提取醇沉淀法提取液样品制备：上述半仿生法提取煎液用95%乙醇调节浓度至70%，沉淀过滤，滤液浓缩成0.25g/ml生物提取法提取液样品制备：参照王淑玲等[5]的研究方法，结合本课题组的研究结果，

5、称取重量为1∶1的白术、茯苓生药材饮片，混匀，加入适宜的酶预处理;再按SBE法，采用正交实验L18(6×36)表，于第1煎和第3煎的溶剂中加入适宜的消化酶，用半仿生-酶法提取3次(加水量分别为中药量的12，10，10倍);提取液分别滤过，离心，合并上清液，浓缩成0.25g/ml。　　1.3动物SPF级SD大鼠56只，体质量(180±20)g，雌雄各半，由成都中医药大学动物实验中心提供，合格证号：SCXK-09-2006。　　1.4试剂VIP放免试剂盒由解放军总医院科技开发中心放免所提供。　　2方法　　2.1造模方法SD大鼠56只，随机分为两组，空白

6、对照组8只，脾气虚证模型组48只，所有造模组大鼠采取隔日灌胃造模药物1次，每次4ml/200g体质量，喂药当日禁食，饮水不限，次日喂饲不限。喂养42d;空白对照组则生理盐水4ml/200g体质量灌服，隔日1次，连续42d。　　2.2实验分组及给药方法造模结束后，造模组大鼠随机分为6组，每组8只。即模型组、水提取法组、水提醇沉法组、半仿生法组、半仿生醇淀组、生物提取法组。于第43天开始灌胃给药治疗，1次/d，连续7d。每组均按生药材0.25g/ml的浓度配制药液，按4ml/200g体重进行灌胃。　　2.3标本采集与处理所有动物处置前禁食24h，饮水不

7、限。实验时每只动物用预置了40μlEDTA及10μl抑肽酶的试管取血2ml，以3000r/min低温离心，分离血浆，装于离心试管，冰冻保存，待测血浆VIP。取血后立即处死大鼠，打开腹腔，自距肛门2cm以上取100mg肠组织1段，在煮沸的生理盐水中煮3min，加1mol/L的冰醋酸0.5ml,匀浆，4℃保存l～2h，加入1mol/L的NaOH0.5ml，中和，离心30min，取上清液，装于离心试管，-20℃保存，待测结肠组织VIP。　　2.4检测方法采用放射免疫法(RIA)检测，由解放军总医院科技开发中心放免所检测。　　2.5数据统计各组数据均采用±

8、s表示，用SPSS12.0统计软件进行数据处理，单因素方差分析，均数间两两比较。　　3结果　　3.1动物造模情况造模后第3