2型糖尿病对大鼠心肌缺血再灌注损伤救援激酶信号通路的影响

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1、2型糖尿病对大鼠心肌缺血再灌注损伤救援激酶信号通路的影响【摘要】目的探讨2型糖尿病(T2DM)对心肌缺血后适应(ischemicpostconditioning，IPO)减轻心肌缺血再灌注损伤作用的影响及可能机制。方法高脂饮食联合STZ诱导制成T2DM大鼠模型，将60只雄性大鼠给予IPO处理后磷酸化Akt及GSK3β的表达无增强，去磷酸化GSK3β表达增强。结论IPO对正常大鼠离体心脏缺血再灌注损伤有明确的保护作用，而对T2DM大鼠心肌缺血再灌注损伤无保护作用;其机制可能与糖尿病状态下影响再灌注损伤救援激酶信号通路，导致GSK3β活性(去磷酸化水平)增高有关。【关键词】缺血后

2、适应;糖尿病;缺血再灌注损伤;再灌注损伤救援激酶信号通路【Abstract】ObjectiveToelucidatetheeffectsofischemicpostconditioning(IPO)onischemia/reperfusion(I/R)cardiacandtheroleofreperfusioninjurysalvagekinasepathlydevidedintoI/Rinnomalrats(A),IPOinnormalrats(B),IPOindiabeticrats(C)groups.Ratsinofglobeischemiaand60minofreperfu

3、sion,thenthemodelsofgroupAade.ButtheratheartsofgroupBandCinofglobeischemiaand10minofreperfusionasIPOduringtheearlyminutesofreperfusion.Phosphorylationofaktandgsk3βmunohistochemicalstaining.ResultsThephosphoaktandphosphogsk3βexpressionsarkedlyinBgroup.ButparedthoseinAgroupthereorelessthanth

4、oseinBgroup.ConclusionsIPOmaysignificantlyprotectmyocardiuminisolatednormalrathearts.Butindiabeticrats,theprotectionofIPOhasnoeffect,themechanismofthisphenominonmayberelatedtogsk3βintheconditionofdiabetic.　　【Keyicpostconditioning;Diabetic;Ischemic/reperfusioninjury;RISKpathicpostconditioning，

5、IPO)可减轻心肌缺血再灌注损伤，其可能的机制是IPO激活再灌注损伤救援激酶(reperfusioninjurysalvageKinase，RISK)通路〔1，4〕。但IPO对糖尿病心肌保护作用目前研究甚少，而且IPO对糖尿病心肌是否存在保护作用的研究结果尚不一致。本研究通过观察IPO在糖尿病状态下RISK通路中重要靶点糖原合成酶激酶(GSK3β)的变化，探讨2型糖尿病(T2DM)大鼠心肌缺血再灌注损伤的保护作用及可能的机制。　　1材料与方法　　1.1材料链脲佐菌素(STZ)、氯化三苯基四氮唑(TTC)购于美国Sigma公司;Akt、PAkt、GSK3β、PGSK3β抗体

6、购于美国CellSignaling公司。　　1.2实验动物与分组60只清洁级雄性动物模型建立给予成年雄性大鼠模型。动物继续喂养4mol/L氯化钠，25mmol/L碳酸氢钠，1.2mmol/L磷酸二氢钾，4.7mmol/L氯化钾，3.0mmol/L氯化钙，1.2mmol/L硫酸镁，11mmol/L葡萄糖，0.5mmol/L乙二胺四乙酸，pH7.4)，1min内主动脉插管悬挂于Langendorff装置上，用改良KrebsHenseleit缓冲液行非循环式主动脉逆行灌流，灌流压65mmHg,灌流液温度维持在37℃，pH7.4,灌流液以95%氧气、5%二氧化碳混合气饱和。A组全心停灌缺

7、血30min，60min复灌再灌注期;B、C两组全心停灌缺血30min后，再灌注开始前先给予再灌注10s，全心停灌缺血10s，共6次循环，然后继续给予再灌注至60min。　　1.5免疫组化染色采用SP法，以PBS代替一抗作为阴性对照染色。石蜡包埋组织切片常规脱蜡至水，以1%H2O2灭活内源性过氧化物酶，室温5～10min，蒸馏水洗3次;枸橼酸盐缓冲液中微波修复抗原，冷却后，0.1mol/LPBS洗1～2次;正常山羊血清封闭非特异性抗原，室温孵育20min，甩去多余液体