几种主要化学发光物质的发光性能及其化学发光免疫分析体系1

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1、维普资讯http://www.cqvip.com标记免疫分析与临床2002年12月第9卷第4期·225·几种主要化学发光物质的发光性能及其化学发光免疫分析体系尹东光，贺佑丰，刘一兵，沈德存，韩世泉，罗志福(中国原子能科学研究院同位素所五十三室，北京102413)文章综述了目前国际上免疫分析中应用的几种主要的化学发光物质的结构、发光机理、发光性能和特点以及其免疫分析体系。目前，在免疫分析领域中应用多种免疫分析CLIA系统，以及全自动化化学发光仪。不同的化方法，其中化学发光免疫分析(CLIA)是将免疫反学发光物质发光机理和发光性能不同，不同的应

2、和化学发光反应相结合，藉以检测抗原或抗体CLIA系统原理和方法各异。本文综述了目前国际的技术。它是将发光物质或酶标记在抗原或抗体上免疫分析中应用的几种主要的化学发光物质及上，免疫反应结束后，加入氧化剂或酶底物而发其免疫分析体系。光，通过测量发射光强度，根据标准曲线测定待1鲁米诺、异鲁米诺及其衍生物类测物的浓度。CLIA的主要优点是灵敏度高、标记鲁米诺(1umino1)、异鲁米诺(isolumino1)及其物有效期长、检测范围宽，可实现全自动化等。衍生物是最早在CLIA中使用的一种常用的化学CLIA具有强大的生命力，在国际和国内倍受临床发光物

3、质n]，它们的结构如下：用户和生物医学工作者的重视。近十年来CLIA的发展迅猛，国外已开发出多种化学发光物质，“鲁米诺氨丁(AB基El)米诺氨已专LA篙HLI米诺氨已基(乙AB基E氯NH萘)二酰肼·这类物质的发光为氧化反应发光，它们在碱体，当其回到基态时发出光子，以鲁米诺为例其性条件下通过辣根过氧化物酶(HRP)催化，被发光机理如下：H。O2氧化生成3一氨基邻苯二酸的激发态中间皿一∞一一内过氧化物(不稳定)激发态基态收稿日期：2002—02—06：修回日期：2002—05—23维普资讯http://www.cqvip.com·226·Lab

4、eledImmunoassays＆ClinMed。December2002，Vo1．9，No．4鲁米诺的发光光子产率约为0．O1，最大发射2吖啶酯及吖淀酰胺类光波长为425nm。早期用鲁米诺直接标记抗原或抗体，但由于标记后发光强度降低而使其灵敏度如果吖啶环上的C一9碳原子链上取代基且受到影响，近年来改用HRP标记抗原或抗体，免该取代基能与吖啶环上的C一9和H202形成有张疫反应后，利用鲁米诺作发光底物，在发光启动力的不稳定的二氧乙烷，此二氧乙烷分解为CO2试剂(NaOH+H202)作用下，鲁米诺发光，发光强和电子激发态的N一甲基吖啶酮，当回

5、到基态时度依赖于免疫反应中酶的浓度。如果不使用增强发出光子，则这类取代吖啶化合物可做为化学发剂，鲁米诺体系的发光基本上为闪光型且信号弱。光标记物。根据取代基的不同，常用作化学发光1983—1984年Whitechead和Thorpe等首先在上标记物的吖啶取代物分为两类：一类为吖啶酯，述体系中加入合成的荧光素即一种6一羟基苯并如图工所示；另一类为吖啶磺酰胺，如图Ⅱ所示：噻唑的衍生物，可以使发光时间延长持续至7min，光信号强度提高7倍，并降低本底信号强度，将信噪比提高达原来的80倍，此即为Luminol／H202／HRP／EnhanceSys

6、tem。1985年发现一些取代酚如对位碘苯酚、1一溴一2一萘酚、对位苯基苯酚、对羟基肉桂酸和4一苯基硼酸等是更好的增强剂，发光的持续时间可延到30—60min，图工和图Ⅱ中的R，R，R可能由烷基、烷烯发光强度至少增加100倍以上。目前鲁米诺、异基、芳基、烷氧基及其取代物等构成，相当于连结鲁米诺及其衍生物应用于CLIA，通常采用的体系吖啶部分和官能团部分的空间手臂，其中R，R是Luminol／H202／HRP／EnhanceSystem，即用还可能起控制反应动力学和稳定性的作用，如果HRP标记抗原或抗体，以鲁米诺或异鲁米诺及其R，R含有吸电子

7、基团，则增加反应速率降低稳定衍生物作发光底物，对碘苯酚或对苯基酚等作增性，含有电子授予体基团，则降低反应速率增加强剂，用NaOH+H。02作发光启动试剂，化学发光稳定性。X、X、X为官能团，它们起的作用是偶联反应2min后，光发射强度达到最高峰；20min后，抗原或抗体Ⅱ，并增加化合物在水中的溶解度。常光强度减少20％。Amersham公司的Amerlite化用做CLIA的吖啶酯和吖啶磺酰胺化合物[4有学发光免疫分析系列商品试剂盒采用Luminol／下面几种结构：H202／HRP／p—iodphenolSystem。CH3．FSo3’III

8、IIIVV维普资讯http://www.cqvip.com标记免疫分析与I临床2002年12月第9卷第4期·227·它们的结构中都有共同的吖啶环，它们的发氧乙烷，此二氧乙烷分解为