转基因深加工产品dna提取方法比较

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1、http://www.paper.edu.cn1转基因深加工产品DNA提取方法比较张明辉，高学军*，敖金霞，秦君东北农业大学生命科学与生物技术研究中心210室(150030)E-mail：zhangminghui2001@sohu.com摘要：转基因农产品检测主要是检测样品中转基因DNA。纯化的DNA是用来进行PCR检测最基本材料。成功的样品制备技术是判断随后采用的分析技术是否合理的关键。对于一般的分析来说，好的制备技术应该是简便、安全、廉价，并且能保证DNA质量和数量。用于检测分析的DNA应具备一定的浓度、纯度、完整性。材料和提取技术都可能对这些参数

2、受到影响，反过来，这些参数也可能影响分析技术是否合理。样品制备的关键步骤包括：均质、预处理、提取、纯化以及恰当的分析方法。所用实验方法必须使分析材料达到最高产量、抑制物最少、污染最小，根据DNA的特点选择最恰当、合理的样品制备方法。关键词：深加工产品；DNA提取1.引言近几年，很多国家已经批准使用转基因农作物和农产品，而要获得真正安全的有足够营养价值的食品，高质量的原材料是必不可少的条件。在欧盟，食品的来源、质量和安全性以变得非常重要。因此，转基因食品的标识问题已经成为食品安全方面讨论的主要议题。这种新兴的生物技术食品引起了很高的重视，由于各种压力的存

3、在，已经有很多国家实行了对食[1]品中的转基因成分进行了标识。同时食品厂家也需要了解原材料是否存在转基因成分。目前，国际上还没有统一的针对深加工转基因产品的标准化检测方法。综合各国的检测方法，主要有两类技术：基于特异性DNA片断的PCR检测技术和基于特异性蛋白质的免疫[2]学检测技术（ELISA法和试纸条法）。前者所采用的特异性DNA片段包括外源启动子、终止子、报告基因和目的基因；后者特异性蛋白质主要是外源目的基因和一些报告基因所表达的蛋白质。两种方法的出发点不同，适用的检测范围也不同，各有利弊。PCR法包括定性法和定量法，由于该方法是建立在DNA水平

4、上，所以即使DNA在高温高压等严峻环境下发生降解，但仍能进行检测，所以此法适用于各种初加工和深加工品，同时PCR法可将深加工产品中残存的DNA增幅到100万倍以上，检出的灵敏度大大提高。而免疫学方法不适用于经深度加工后使蛋白质变性的产品，灵敏度较低，此法只适用于原材料的快速检测，且仍需要[3]PCR法进行最后的确证检验。2.深加工产品中转基因成分检测存在的问题[4，5]所以，核酸已经成为食品分析中的重要工具，而且转基因和非转基因食品的辨别最好能从DNA水平来证明插入基因是否存在。在分析之前必须从材料中应将DNA提取出来。但是目前为止，DNA或RNA很少

5、用在食品分析中，所以关于加工食品的核酸知识了解很少。[6]所以，尽管已知很多DNA提取方法，但仍然满足不了需要。以转基因生物为直接原料的深加工品和普通深加工品一样，都要经过若干道加工程序，理化性质发生很大变化，营养成分重新搭配并分割很细，这无疑在很大程度上增加了其中转基因成分检测的难度。由于深度加工使原料DNA在加工过程中遭到严重破坏，加工中出现的某些物理、化学或酶因子也会影响DNA质量，例如罐装制品在加工过程中导致DNA降解；1本课题得到东北农业大学黑龙江省农业生物基因检测中心专项科研基金（黑计投（2002）1041号）资助。-1-http://ww

6、w.paper.edu.cn番茄果汁制造时采用低pH,促使DNA发生化学修饰和降解；在延长新鲜食品贮藏期时，核酸2+2+酶也可能会降解DNA;深加工品中常含有阳离子（如Ca，Fe）、微量重金属、碳水化合物、单宁酸、酚类、盐分、亚硝酸盐等物质均能抑制PCR检测反应，这些抑制剂也常因食品种类不同而差异很大，因此需要依据深加工品的种类和其中可能存在的PCR反应抑制剂采取不同的DNA提取方法，以降低或消除这些抑制剂的存在，提高检测的灵敏度和准确性。由此可见，在基于DNA扩增的转基因检测技术中，DNA提取技术尤其是深加工品中DNA提取是其转基因检测体系建立的重要

7、制约因素，也是后续转基因检测成功与否的关键所在。样品提取的主要目的是：使分离的DNA具有符合特定浓度、数量和完整性的要求，为随后的分析作[8]准备。研制适用于各种深加工转基因产品的DNA提取技术将使转基因检测技术上一个新台阶，为检验机构特别是出入境检验机构提供极大方便，也有利于检测方法的标准化，为更多[9]的深加工产品市场标识提供技术保障。制备样品之前要熟悉实验材料特性及所要采取的分析方法（如定量检测或定性检测）。从而选择恰当的DNA提取方法。因此应该考虑提取方法是否适用于所要研究的深加工产品。以下将讨论不同DNA提取方法的操作步骤特点。步骤概括如表1

8、、2，详细说明如下。3.方法总结3.1实验材料的准备大多的深加工产品都会经过不同程度的加工处理