4种油松针叶dna提取方法比较

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1、4种油松针叶DNA提取方法比较摘要:采用SDS法、简易提取法、高盐沉淀法和改良的CTAB法从油松(Pinustabulaeformis)针叶提取基因组DNA,通过琼脂糖凝胶电泳、紫外分光光度法和PCR检测提取的DNA质量。结果表明,改良的CTAB法提取的油松针叶基因组DNA浓度和纯度高,适合用于ISSR-PCR分析,优于其他3种提取方法。关键词:油松(Pinustabulaeformis);SDS法;简易提取法;高盐沉淀法;改良的CTAB法;DNA提取中图分类号:S791.254;Q946.2文献标识码:A文章编号:0439-81

2、14(2012)17-3876-03ComparisonofFourMethodsofDNAExtractionfromNeedlesofPinustabulaeformisLIMing1a,YUANSheng-liang1b,GAOBao-jia1c,2(1a.CollegeofLifeSciences;1b.GraduateSchool;1c.CollegeofForest,AgriculturalUniversityofHebei,Baoding5071001,Hebei,China;2.HebeiNorthUniversi

3、ty,Zhangjiakou075000,Hebei,China)Abstract:SDSmethod,simpleextractionmethod,highsaltextractionmethodandmodifiedCTABmethodwereappliedtoextractDNAfromtheneedleofChinesepine(Pinustabulaeformis).AndthequalityofextractedDNAwasdeterminedbyagarosegelelectrophoresis,UVspectrop

4、hotometryandPCR.TheresultsshowedthattheconcentrationandpurityofDNAobtainedfrommodifiedCTABmethodwasbetterthanthatfromtheother3methods,andcouldbeusedinISSR-PCRanalysisofP.5tabulaeformis.Keywords:Pinustabulaeformis;SDSmethod;simpleextractionmethod;highsaltextractionmeth

5、od;modifiedCTABmethod;DNAextraction油松(Pinustabulaeformis)是中国特有树种,是构成中国北方温带针叶林的主要建群树种之一,其适应性强、树形美观、四季常青,可作为重要的工业用材、荒山造林和城镇绿化树种。目前对油松分子水平的遗传变异已有一定研究[1-4],但由于油松含有大量次生物质,属于顽拗植物,提取高质量的基因组DNA具有一定难度,是制约实验进展的关键因素之一[5-12]。本研究在总结目前常用的几种植物基因组DNA提取方法的基础上,采用SDS法、简易提取法、高盐沉淀法和改良的CTA

6、B法4种方法从油松针叶中提取总DNA,并通过琼脂糖凝胶电泳及紫外分光光度法对提取效果进行评估和检测,以期为油松的分子生物学和群体遗传学研究奠定基础。1材料和方法1.1材料与仪器5实验用油松材料于2009年7月采于河北省辽河源国家级森林公园(北纬41°00′-41°10′,东经118°30′-118°40′),采集当年生幼嫩针叶置于冰盒中带回实验室,于-70℃超低温冰箱中保存。提取DNA之前用70%的乙醇(体积分数,下同)清洗表面或浸泡1min以去除外源的DNA污染,并用灭菌水冲洗干净。TGL16M离心机,长沙易达技贸有限公司;HH

7、-4水浴锅、HY-5回旋式振荡器,金坛市杰瑞尔电器有限公司;LS-CSOL型立式灭菌锅,北京瑞泽康生物科技有限公司;DYY-2C电泳仪,北京市六一仪器厂;凝胶成像仪,Bio-Rad;9700型PCR仪,ABI。1.2油松针叶基因组DNA的提取1.2.1SDS法①取油松针叶2g,加液氮研磨成粉末,加入1mLSDS提取缓冲液(15mg/LSDS、100mmol/LTris-HCl、20mmol/LEDTA、500mmol/LNaCl,pH8.0)和1/5体积10%SDS提取液(0.1g/LSDS、100mmol/LTris-HCl、2

8、0mmol/LEDTA、500mmol/LNaCl,pH8.0)于1.5mL离心管中,65℃水浴1h;②加入1/10体积的5mol/LKAc,冰浴30min,4℃、10000r/min离心10min;③取上清液,加入等体积的Tris酚-氯仿-异戊醇

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