紫外可见分光光度法测定水产品中孔雀石绿含量

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1、万方数据2009年第5期总第94期《福建师范大学福清分校学报》JOURNALOFFUQINGBRANCHOFFUJIANNORMALUNIVERSITYSumNo．94紫外可见分光光度法测定水产品中孔雀石绿含量林谦，林炜，叶瑞洪(福建师范大学福清分校生物与化学工程系，福建福清350300)摘要：用乙腈溶解孔雀石绿固体，采用紫外分光光度法检测水产品中孔雀石绿的含量。实验证明孔雀石绿的最佳吸收波长为619nm，该方法的线性范围为0．08—70VLg／mL，线性系数R为0．9993，最低检出限为O．0200V,g／mL,,在0．1、1．0、10．OwdmL3个

2、浓度水平加标回收率为93．6％一99．O％。相对标准偏差为0．09％。0．43％(n=3)。连续测定3个浓度水平的吸光度11次，测得RSD为0．17％．,-0．35％(n=11)。本实验还考察了缓冲液的种类、pH值、用量、以及各种常规干扰离子等条件对测定孔雀石绿的影响，优化了检测过程。关键词：孔雀石绿；测定；紫外可见分光光度法中图分类号：x56文献标识码：A文章编号：1008—3421(2009)05-0060-05孔雀石绿I-c为HZ。N2]是一种带有金属光泽的绿色结晶体属三苯甲烷类染料，又名碱性绿、严基块绿、孔雀绿，既是工业性染料，又是一种杀真菌剂。

3、自上世纪30年代以来，许多国家曾经采用孔雀石绿杀灭鱼类体内外寄生虫和鱼卵中的霉菌，对鱼类水霉病、原虫病等的控制非常有效，而且操作方便，价格低廉。但研究发现：孔雀石绿是一种高毒素物质，其化学官能团三苯甲烷是一种致癌物质，并有高残留的作用，能在鱼体内长时间残留，通过食物链对哺乳动物和人类产生致畸、致癌、致突变等作用，同时含孔雀石绿的养殖废水排放会污染水环境。为了有效地监控禁用药物孔雀石绿的使用，某些国家还规定了严格的检出限【n。为预防孔雀石绿造成的严重影响，采用何种方法能够快速、简便、准确地检测水产品中的孔雀石绿含量已经迫在眉睫，更是当前学术界研究讨论的热点

4、问题。目前，高效液相色谱法[2-5J、高效液相色谱一串联质谱法[6-91、共振瑞利散射法110l等孔雀石绿的检测方法都在不断地改进完善，但仍有一些难以解决的问题，如成本过高、检出限高、操作复杂等。在高效液相色谱法中，仍选用紫外检测器来测定孔雀石绿的吸光度【ll】。因此，本实验采用通过紫外分光光度计测出乙腈溶解孔雀石绿固体的溶液的吸光度，求其含量的方法，方法简便快速，准确度较高，成本较低，有望广泛应用。1材料与样品处理1．1材料1．1．1仪器PHS-25型数显酸度计：上海虹益仪器仪表有限公司；BS224S型电子天平：北京赛多利斯仪器系统有限公司；721E型

5、紫外分光光度计：上海光谱仪器有限公司。1．1．2药品与试剂孔雀石绿标准样品(中国上海标本模型厂)；冰醋酸(天津市北联精细化学品开发有限公司)；乙酸铵(蚌埠电化试剂厂)；二甘醇(上海成海化学工业有限公司)；盐酸羟胺(福州大学光催化所)；收稿日期：2009--04-25作者简介：林谦(1970-)，女，福建莆田人，实验师。万方数据第5期林谦，林炜，叶瑞洪：紫外可见分光光度法测定水产品中孔雀石绿含量61对甲苯磺酸(成都市科龙化工试剂厂)；乙腈(上海成海化学工业有限公司)，以上试剂均为分析纯。鱼样品(福清检验检疫局提供)。1．1．3标准溶液的配制孔雀石绿标准溶液

6、：准确称取孔雀石绿0．0109，用乙腈溶解，定容于100ml容量瓶中，配制成10-49／ml的标准溶液，再用蒸馏水稀释成相应浓度的孔雀石绿溶液。1．1．4混合提取液的配制准确称取盐酸羟胺6．79，对甲苯磺酸0．429，乙酸铵0．249，于250mL蒸馏水中溶解，并用冰醋酸调节pH至3．0，备用嘲。1．2样品处理1．2．1提取与净化称取处理好的样品约409置于500mL烧杯中，加混合提取溶液60mL，匀浆5min，将样品转移到250mL容量瓶中，用30mL乙腈分3次洗涤烧杯，洗涤液合并到容量瓶中，向容量瓶中加入209中性氧化铝吸附样品中油脂，将容量瓶振荡约

7、lO分钟后，转移样品至4支50mL离心管中，以4000vtnin离心10分钟，将离心管中上清液移入1000mL分液漏斗中，向离心管内加入30ml乙腈，振摇离心管，使样品与乙腈充分混合，如上所述再次离心，合并上清液至分液漏斗中，向分液漏斗中加入100mL蒸馏水，50mL二氯甲烷，另加5mL二甘醇用于消除乳化，剧烈振摇分液漏斗，静置分层，用容量瓶收集下层液体后，再往分液漏斗中加入50mL二氯甲烷，振摇，静置，待其分层后收集下层液体于同一容量瓶中，将收集液在50。C下减压旋转蒸发至近干，取下蒸发瓶，用乙腈洗涤蒸发瓶，定容到2mL，即得样品溶液。1．2．2样品测

8、定室温下在不同的底液下将标准溶液于lcm的玻璃比色皿中进样，以相应空白溶液作参比