石榴籽油对雌激素相关的骨质疏松症小鼠骨量的影响及分子机制的研究

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1、石榴籽油对雌激素相关的骨质疏松症小歐骨量的影响及分子机制的研究许文胜康文磊陈永军杨增华张涛包头医学院第一附属医院骨三科内蒙古包头014010FI的：观察石榴籽油对雌激素相关的骨质疏松症小鼠股骨近端骨密度及骨小梁微结构的影响，观察相关细胞的形态学变化，分析探讨其作用机制。［方法］:将30只雌性KM小鼠按体重随机分为3组：空白对照组、实验对照组、实验组，除空G对照组实施假手术外，其余2组全部在麻醉不切除卵巢制作成骨质疏松症模型，分别给实验对照组和实验组喂食普通饲料和添加一定剂量的石榴籽油的饲料，4周后拟对小鼠股骨近端骨小梁微结构进行检测。同时对4周后三组动物采血获得其血

2、淸，利用体外血淸培养成骨细胞和破骨细胞，研宂三组动物血清对成骨细胞和破骨细胞相关基因表达的影响。［结果］:实验对照组动物股骨近端骨小梁微结构破坏程度最为严重，其次为实验组，空白组骨小梁微结构正常;石榴籽油代谢物（CLA9C）抑制RANKL诱导破骨细胞的分化，通过增加碱性磷酸酶（ALP）活性和基质矿化促进成骨，同时，主要的转录水平（ALP，Colllal,BSP,OCN,OPG,OPNand成骨细胞标记物（DDR2,Colllal,ALP等）呈现显著上调。［结论石榴子油可以抑制雌激素相关的骨质疏松症骨量的丢失同时可以促进成骨细胞分化，抑制破骨细胞活性关键词：石榴籽油；

3、雌激素相关骨质疏松症；骨量的影响；分子机制Keywords：pomegranateseedoil；osteoporosis；regulationofestrogen；preventsbonelossandmolecularmechanism近年来，有关石榴食用和药用价值的研究越来越为人们所关注，石榴籽油富含不饱和脂肪酸•石榴酸，具备多种药理功能，本研宂R在观察石榴籽油对雌激素相关的骨质疏松症小鼠股骨近端骨密度及骨小梁微结构的影响，观察相关组织形态学变化，分析探讨其作用机制，为预防和治疗女性绝经后骨质疏松症提供安全、经济、有效的食物或药物做初步探讨。1、材料与方法1.

4、1建立动物模型、分组和膳食干预将30只雌性KM小鼠按体重随机分为3组：空白对照组、实验对照组和实验组，除空白对照组实施模拟手术外，其余2组全部在麻醉下切除卵巢制作成骨质疏松症模型，给模拟组和实验组喂食普通饲料和添加5%石榴籽油的饲料，4周后麻醉下处死小鼠，取出双侧股骨加以检测分析1.2组织形态学检测对实验动物股骨近端进行5μm厚非脱灰组织切片，并用酒石酸抵抗性的酸性磷酸酶（TRAP）进行染色。形态学计量用与光学纤维镜相连的半自动显微图像分析仪（型号：TRH-JX2000A/B）,对股骨近端二次海绵骨组织构造，进行定量分析，内容包括骨的骨量/组织量、骨小梁厚度和

5、骨小梁间距，并对酒石酸抵抗性酸性磷酸酶阳性多核破骨细胞的数0进行测定。1.3模型动物体外血清实验将30只8周龄的KM小鼠（购自内蒙古大学实验动物中心）经过1周的适应性喂养，随机分为2组（N=15）,—组是PSO组，另一组是普通对照组，PSO组每天的灌胃剂量为200μG，对照组使用相冋的剂量，10天后，麻醉下心脏抽血离心（3000r/min,5min室温），去上清液，与同一组动物血清混合，过波45μM,分装并储存在-80°C直到细胞使用到培养基为止。以最适浓度的NF-kB受体活化因子配体（RANKL）作为诱导剂，在体外细胞培养基诱导培养小鼠单核/巨噬细胞系

6、RAW264.7细胞分化为破骨细胞，待破骨细胞分化成熟后，通过抗洒石酸酸性磷酸酶（TRAP）染色法进行破骨细胞鉴定，并采用real-timePCR方法检测各不同处理组之间，破骨细胞表型基因及功能基因NF-κB受体活化因子（RANK）、抗酒石酸酸性磷酸酶（TRAP）、基质金属蛋白酶-9（MMP-9）、破骨细胞降钙素受体（CTR）、组织蛋白酶K（CTSK）、趋化因子受体CCR2和整合素基因β3（ITG-β3）的mRNA表达的差异。经过体外特定培养基培养小鼠前成骨细胞MC3T3-E1,检测细胞的增殖及基因的表达量，对骨碱性磷酸酶(ALP)、

7、骨保护素基因(OPG)、骨唾液酸蛋白(BSP)、骨钙素(OCN)、骨桥蛋白(OPN)、盘状结构域受体2(DDR2)、I型胶原蛋白(Colllal)进行检测。2结果图13组动物股骨近端骨小梁微结构变化比较图2对特定细胞因子蛋白表达的调节作用3讨论绝经后骨质疏松症(POP)是老年妇女的常见病和多发病，是以骨量减少，骨小梁微结构破坏，脆性骨折风险性增加为主要特征的全身性骨骼系统疾病［1］。3.1雌激素对骨质疏松症的作用关系雌激素对骨质疏松发病的影响主要是通过以下途经实现。1.对钙调节激素的作用雌激素可以增强肝25-幾化酶肾lα-轻化酶活性，提高1，25-双