二 ■ 英对小鼠异位子宫内膜影响的分子机制研究

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1、二■英对小鼠异位子宫内膜影响的分子机制研究【摘要】【目的】探讨四氯二苯并二■英(TCDD)对子宫内膜异位症小鼠模型的影响及其分子学机制。【方法】采用小鼠自体子宫内膜移植法建立小鼠子宫内膜异位症模型，分别给予TCDD0、l、3、10μg/kg剂量灌胃，每21d1次，于建模术后3、6、9周处死，鉴定异位病灶的形成，测量异位病灶体积。采用免疫组化法和RT-PCR法检测各组小鼠异位子宫内膜组织中芳香烃受体(AhR)和细胞色素P4501A1(CYP1A1)表达水平。【结果】①染毒组小鼠异位病灶体积的增加与染毒剂量和时间具有明显的正相关性(r=

2、为0.727、0.553，均P<0.05);②染毒组小鼠异位子宫内膜AhR蛋白较对照组增强(P<0.05);且随染毒剂量增加和染毒时间延长，AhR蛋白表达相应增加(r分别为0.687、0.442，均P<0.01);③随染毒剂量增加，CYP1A1蛋白表达相应增加(r=0.640，P<0.01)，对照组未检测到CYP1A1蛋白表达;④染毒组小鼠异位子宫内膜AhRmRNA较对照组增强(P<0.05)。随染毒剂量增加和暴露时间延长，AhRmRNA表达相应增加(r分别为0.565、0.635，P<0.01)

3、;⑤随染毒剂量的增加，CYP1A1mRNA表达明显增加(r=0.659，P<0.01)，对照组小鼠异位子宫内膜病灶中未检测到CYP1A1mRNA。【结论】TCDD可促进小鼠模型异位子宫内膜病灶的发展，其机制可能与AhR及其下游基因CYP1A1激活有关。AhR及CYP1A1的表达增强是二■英暴露的生化指标。【关键词】四氯二苯并二■英;子宫内膜异位症;小鼠;AhR;CYP1A1　Abstract：【Objective】Toinvestigatetheeffectof2，3，7，8-tetrachlorodibenzo-p-diox

4、in(TCDD)ondevelopmentofendometriosisinamousemodelfromperspectiveofmolecularmechanism.【Methods】Theendometriosismousemodeletrium.Tetriosis，femalemicegTCDD/kg.Animalseofsurgeryandat3，6，and9eteradeat3，6，9etriummunohistochemistryandRT-PCRassays.【Results】①S)是育龄妇女的常见病，但其发病机制尚

5、不清楚。近年来流行病学调查发现二■英(dioxin)污染越严重的国家或地区，其EMS的发病率越高[1]。所以，推测涉及外来物解毒的酶活性的改变可能是EMS的危险因素[2]。毒理研究发现二■英通过与芳香烃受体(arylhydrocarbonreceptor，AhR)结合并激活AhR介导的信号途径，发挥不同毒性效应[3]。细胞色素P4501A1(CytochromeP4501A1，CYP1A1)属重要的I相解毒酶，是目前研究最多的AhR反应基因，报道称其基因多态性可能与子宫内膜异位症的形成密切相关[2]。本文选择二■英中最具代表性的2，

6、3，7，8-四氯二苯并-对-二■英(2，3，7，8-tetrachlorodibenzo-p-dioxin，TCDD)为研究对象，探讨在EMS模型中不同剂量及时间TCDD作用模式下TCDD样配体AhR及其下游活性物质CYP1A1的基因表达状态，探寻TCDD在EMS中可能涉及的分子水平作用机制。　　1材料和方法　　1.1动物建模　　参考1996年Cummings的啮齿类动物TCDD实验模式建模[4-5]，60只成熟未孕SPF级ICR雌性小鼠(体质量为28～32g，购自南通大学实验动物中心)随机分为3个时间组(3周组、6周组、9周组)，

7、每组20只，每组再随机分成4个TCDD(标准品纯度>99%，购自Cerilliant公司)剂量组(每组5只)，其分别为对照组(0μg/kg)、低剂量组(1μg/kg)，中剂量组(3μg/kg)和高剂量组(10μg/kg)。通过灌胃法染毒，每21d给药1次，首次给药时间记为0d，在给药的第21天，再次给药同时行小鼠自体子宫内膜移植术[6]，自一侧子宫角取约2mm×1mm组织2块，分别缝合在小鼠腹膜、卵巢。分别在术后3、6、9周采用脱臼法依次处死各组小鼠，3周组小鼠共暴露TCDD2次;6周组小鼠共暴露TCDD3次;9周组小鼠共暴露

8、TCDD4次。　　1.2免疫组织化学检测　　AhR(PRT9)单克隆抗体(北京中杉金桥生物技术有限公司)和CYP1A1(B-4)单克隆抗体(SantaCruzBiotechnology)分别作为一抗。石蜡切片，采用SP法，染色步骤按试