钙离子阻滞剂对铁诱导神经干细胞损伤的保护作用

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1、钙离子阻滞剂对铁诱导神经干细胞损伤的保护作用陈文雄1黄珍妮2杨默3吴武田4苏焕兴5陈志峰*2（1.广州市妇女儿童医疗中心神经康复科广东广州510623；2.香港大学李嘉诚医学院儿童与青少年系）（3.南方医科大学南方医院血液科510515；4.香港大学李嘉诚医学院解剖学系）（5.澳门大学中华医药研宄院中药质量研究国家重点实验室）目的：研究铁超负荷对鼠神经干细胞的细胞活性、凋亡及ERK磷酸化的影响，探讨钙离子阻滞剂对铁诱导鼠神经干细胞损伤的保护作用。方法:釆纳小鼠祌经干细胞系C17.2细胞及大鼠胚胎海马祌经干细胞为细胞模型。XTT比色法检测细胞活性。AnnexinV/PI,活化cas

2、pase-3及线粒体膜电位（JC-1）流式细胞仪检测细胞凋亡。抗-磷酸化-ERK1/2流式细胞仪检测ERK磷酸化。结果.•铁超负荷通过诱导线粒体损伤及Caspase-3活化，以浓度及时间依赖方式（0.15?1.8mmol/L；24&48小时）显著降低鼠神经干细胞活性。临床相关浓度铁超负荷（0.6?0.9mmol/L）还能诱导鼠神经干细胞ERK磷酸化。钙离子阻滞剂（氟桂利嗪或尼莫地平）能减少临床相关浓度铁超负荷所诱导的鼠祌经干细胞的ERK磷酸化及线粒体损伤，减轻铁诱导细胞凋亡，显著地改善了细胞活性。结论：铁超负荷诱导鼠神经干细胞ERK磷酸化，经历线粒体介导的凋亡。钙离子阻滞

3、剂可抑制上述过程，减少铁诱导鼠祌经干细胞凋亡。【关键词】铁超负荷；神经干细胞；钙离子阻滞剂；细胞外信号调节酶（ERK）R363A1004-6194（2015）01-0088-03【Abstract】Background:Excessiveironaccumulationinthebrainwithoxidativedamagehasbeenobservedinneurodegenerativedisordersandhemorrhagicstroke.Objectives:Tostudytheinfluenceofiron-overloadoncellviability,apop

4、tosisandERKphosphorylationofNSCs；ToexploretheprotectivepotentialofcalciumchannelblockersonNSCsunderironoverloadedcondition.Methods：ThemurineneuralstemcelllineC17.2cellsandratembryonic(E17.5)hippocampalneuralstemcells(hNSCs)servedasacellmodel.Thedivalentortrivalentironcompounds(ferrousammonium

5、sulfate,ferricchlorideandferricammoniumcitrate),calciumchannelblockers(nimodipineandflunarizine)wereusedinthestudy.XTTcolorimetricmethodwasadoptedtodetectthecellviability.TheAnnexinV/PI,ActiveCaspase-3andJC-1viaflowcytometrywereusedtomeasureapoptoticcells,whileanti-phospho-ERKl/2wasadoptedtod

6、etectERKphosphorylationbyflowcytometry.Results:Ourresultsshowedthatironoverloadsignificantlydecreasedcellviabilityviainducingmitochondrialdamageandcaspase-3activityinadose-andtime-dependentmanner(0.1571.8mmol/L,24&48hrs).Clinicallyrelevantdosesofiron(0.6?0.9mM)alsoinducedERKactivationofNS

7、Cs.Undersuchconditions,calciumchannelblockerscouldsignificantlyimprovecellviabilitybypartiallyamelioratedironinducedapoptosisviapreventingmitochondrialdamage.CalciumchannelblockersalsopreventedERKactivationiniron-overloadedNSCs.Conclusions:In