连翘酯苷a对内毒素致鸡脾淋巴细胞白介素-1β的影响

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1、连翘酯苷A对内毒素致鸡脾淋巴细胞白介素-10的影响程广东张强关楠楠岳丽红王长平腹冶奎艳华佳木斯大学生命科学学院东北农业大学动物医学学篋佳木斯大学畜牧兽医科学研宄所佳木斯大学公共卫生学院试验旨在研究内毒素和连翘酯苷A对鸡脾淋巴细胞中白介素-1（3（TL-113）水平的影响，将1日龄雏鸡常规饲养至50日龄时，心脏采血处死后，无菌剖检取脾，并用鸡脾淋巴细胞分离液将鸡脾淋巴细胞分为20个组，具体为5个时间点X4个剂量组=20个组。作用时间分别为0、6、12、24和48h,作用剂量组分别为对照组、内毒素（LPS）组（5pg/mL）、连翘酯苷A预防低剂

2、量组（5Pg/mLLPS+200ug/mL连翘酯苷A）和连翘酯苷A预防高剂量组（5ug/mLLPS+400ug/mL连翘酯苻A）。按上述方法培养后，收集鸡脾淋巴细胞，采用酶联免疫吸附试验（ELISA）和实时荧光定量PCR（qRT-PCR）方法检测鸡脾淋巴细胞中1L-1P水平。EL1SA结果显示:与对照组相比，LPS组鸡脾淋巴细胞中1L-1P蛋白含量升高;与LPS组相比，连翘酯苷A预防组鸡脾淋巴细胞中IL-1P蛋白含量下降，并与连翘酯苻A添加剂量呈正相关。qRT-PCR结果显示:与对照组相比,LPS组鸡脾淋巴细胞屮IL-1PmRNA表达量升高

3、;与LPS组相比，连翘酯苷A预防组鸡脾淋巴细胞中IL-lfimRNA表达量下降，并呈剂量时间效应。试验表明LPS可以诱导鸡脾淋巴细胞中IL-lfi蛋白含量和mRNA表达量升高，而连翘酯苷A预防组鸡脾淋巴细胞中IL-10蛋白含量和mRNA表达量下降，表明连翘酯苷A可以通过转录和翻译途径抑制LPS诱导的鸡脾淋巴细胞中TL-1P蛋白含量和mRNA表达量的升高，减轻炎症反应，发挥抗炎功能。关键词：连翘酯苷A;内毒素;淋巴细胞;白介素-ie;通信地址:黑龙江省佳木斯市学府街148号佳木斯大学生命科学学院154007基金：黑龙江省自然科学基金面上项目(

4、C201450)连翘酯卄A是连翘的主要有效.单体成分之一，具有连翘所具有的药理学功能，如抗菌、抗病毒及抗炎等，可干扰炎症因子的蛋G含量及表达水平，在炎症反应中发挥重要作用，可介导机体免疫反应U1。内毒素又称脂多糖(LPS),是革兰阴性细菌细胞壁的成分之一，能引发多种动物炎症反应，常被用于复制炎症模型m。当机体受到外界刺激引发炎症时，脾等外周免疫器官释放白介素-1(TI-1)等炎症因子，激发炎症反应。TL-1主要包含IL-lci和TL-1P两种形式,当其含量升高时，可进一步刺激免疫器官释放白介素-17(IL-17)和白介素-6(1L-6)等炎

5、症因子U1。帅学宏等U1研宄发现，25mg/kg青蒿多糖可使血清中IL-6含量提高,50mg/kg青蒿多糖可使血清中IL-1P和白介素-2(IL-2)含量提高，100mg/kg青蒿多糖可降低血清中IL-6含量，结果表明青蒿多糖可调节TL-6和TL-1P等炎症因子的表达水平。试验在体外条件下，通过LPS构建鸡脾淋巴细胞炎症模型，利用2种浓度连翘酯苷A分别作用5个时间后，检测鸡脾淋巴细胞中1L-1P蛋白含量和mRNA表达量，研究药物作用的剂量与时间效应及连翘酯苷A抗LPS诱导的鸡脾炎症机制，为中药作为饲料添加剂应用方面的研究提供理论依据。1材料

6、与方法1.1试验材料与主要仪器1円龄AA肉鸡均购自哈尔滨兽医研宄所动物中心。主要试剂:连翘酯苷A(纯度〉98%)和LPS(血清型055:B5)，均购于黑龙江四叶草生物科技有限公司。主要仪器:酶标仪(瑞士TECAN-F50)和LightCycler480(美国Roche公司)。1.2试验方法1.2.1试验处理与分组将1円龄AA肉鸡常规饲养至50円龄时，采用心脏采血处死方法，鸡经表面浸泡消毒，在超净工作台中剖检，无菌摘取脾，按程广东边1论文中方法，用配好的鸡淋巴细胞分离液分离鸡脾淋巴细胞。采用梯度离心法，并用带注射器的分离针吸取鸡脾淋巴细胞，加

7、到含10%胎牛血清的DMEM培养液屮，通过血球计数板将淋巴细胞计数，使10mL培养液中的淋巴细胞浓度为4X10个/mL，并转到一次性培养瓶中培养。脾淋巴细胞处理及分组如下:共20个试验组，形成5个时间点与4个剂量组交叉模式。5个时间点分别为0、6、12、24和48h,4个剂量组分别为对照组、LPS组（5ug/mL）、连翘酯苷A预防低剂量组（5ug/mLLPS+200ug/L连翘酯苷A）和连翘酯苷A预防高剂量组（5ug/mLLPS+400ng/mL连翘酯苷A）。1.2.2酶联免疫吸附试验（ELISA）检测鸡脾淋巴细胞中白介素-IP蛋白含量按程

8、广东m论文中操作说明检测各组鸡脾淋巴细胞样品中IL-13蛋0含量。1.2.3实时荧光定量PCR（qRT-PCR）检测鸡脾淋巴细胞中白介素-1PmRNA表达量将不同处理组的鸡脾淋巴