葡萄snrk2家族基因的鉴定与表达分析

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1、园艺学报，2016，43(10)：1891–1992.ActaHorticulturaeSinicadoi：10.16420/j.issn.0513-353x.2015-0912；http：//www.ahs.ac.cn1891葡萄SnRK2家族基因的鉴定与表达分析*马宗桓，毛娟，李文芳，杨世茂，吴金红，陈佰鸿（甘肃农业大学园艺学院，兰州730070）摘要：以‘宝石无核’（RubySeedless）葡萄试管苗为材料，采用RT-PCR技术，克隆得到8个葡萄SnRK2家族基因。序列分析发现，该家族基因蛋白结构在N端相对保守，而在C端极其特异；聚类结果表明葡萄SnRK

2、2基因家族可以分为3个亚家族；对这8个基因所编码的蛋白质进行分析发现，其富含酸性氨基酸，且均为亲水蛋白；基因组结构分析发现VvSnRK2.2和VvSnRK2.8含有10个外显子，其他6个均含9个外显子；对蛋白二级结构分析发现8个基因编码的蛋白主要以α–螺旋、β–转角和不规则卷曲为主；亚细胞定位预测，8个基因主要定位于细胞质中。顺式作用元件分析表明，除VvSnRK2.1、VvSnRK2.2、VvSnRK2.6外，其他基因顺式作用元件包含ABRE、DRE/CRT、LRTE中的一个或多个。定量PCR分析表明，VvSnRK2的表达存在组织差异性，VvSnRK2.7在根中

3、表达水平最高，是叶片的3.8倍，VvSnRK2.8在茎中表达水平最高，是叶片的5.0倍。0~–4℃处理后，表达水平下调幅度最小的为VvSnRK2.2，VvSnRK2.7下调幅度较大，VvSnRK2.8的表达水平为0；30℃处理后VvSnRK2.2和VvSnRK2.5上调表达，分别为对照的3.8倍和3.6倍；VvSnRK2.1和VvSnRK2.2与盐胁迫调节紧密相关，VvSnRK2.5与干旱胁迫调节密切相关。关键词：葡萄；SnRK2家族；基因克隆；荧光定量；基因表达中图分类号：S663.1文献标志码：A文章编号：0513-353X（2016）10-1891-12I

4、dentificationandExpressionProfileoftheSnRK2FamilyGenesinGrapevine*MAZong-huan，MAOJuan，LIWen-fang，YANGShi-mao，WUJin-hong，andCHENBai-hong（CollegeofHorticulture，GansuAgriculturalUniversity，Lanzhou730070，China）Abstract：FulllengthcDNAsequenceof8grapeSnRK2genes（VvSnRK2）wereclonedfromgrapev

5、ineRubySeedlessusingRT-PCR，sequenceanalysisshowedthattheN-terminaldomainofVvSnRK2washighlyconserved，whiledivergentintheC-terminal.ThephylogenyeticanalysisshowedthatVvSnRK2scouldbedividedintothreegroups.TheVvSnRK2sproteincarryallacidicaminoacidsandtheyallhydrophilicproteins.AllVvSnRK2

6、butVvSnRK2.2，VvSnRK2.8genescarry9exons.Thepredictedsecondarystructuresuggestedthatthemainstructureofeightproteinsarealphahelix，betaturnandrandomcoil.Thesubcellularlocalizationwerepredictedinthecytoplasmic.Theanalysisofcis-regulatoryelementsshowedthatVvSnRK2scontainedoneormoreofABRE，D

7、RE/CRT，LRTEelementsexceptVvSnRK2.1，VvSnRK2.2andVvSnRK2.6.Quantitativereal-timePCRdataindicatethatVvSnRK2.7andVvSnRK2.8wereexpressedatthehighest-levelintherootsandstems，whichwereas3.8and5.0timesas收稿日期：2016–07–04；修回日期：2016–09–20基金项目：国家自然科学基金项目（31460500）*通信作者Authorforcorrespondence（E-ma

8、il：bhch@gsau