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时间:2018-04-16
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1、园艺学报,2016,43(10):1891–1992.ActaHorticulturaeSinicadoi:10.16420/j.issn.0513-353x.2015-0912;http://www.ahs.ac.cn1891葡萄SnRK2家族基因的鉴定与表达分析*马宗桓,毛娟,李文芳,杨世茂,吴金红,陈佰鸿(甘肃农业大学园艺学院,兰州730070)摘要:以‘宝石无核’(RubySeedless)葡萄试管苗为材料,采用RT-PCR技术,克隆得到8个葡萄SnRK2家族基因。序列分析发现,该家族基因蛋白结构在N端相对保守,而在C端极其特异;聚类结果表明葡萄SnRK
2、2基因家族可以分为3个亚家族;对这8个基因所编码的蛋白质进行分析发现,其富含酸性氨基酸,且均为亲水蛋白;基因组结构分析发现VvSnRK2.2和VvSnRK2.8含有10个外显子,其他6个均含9个外显子;对蛋白二级结构分析发现8个基因编码的蛋白主要以α–螺旋、β–转角和不规则卷曲为主;亚细胞定位预测,8个基因主要定位于细胞质中。顺式作用元件分析表明,除VvSnRK2.1、VvSnRK2.2、VvSnRK2.6外,其他基因顺式作用元件包含ABRE、DRE/CRT、LRTE中的一个或多个。定量PCR分析表明,VvSnRK2的表达存在组织差异性,VvSnRK2.7在根中
3、表达水平最高,是叶片的3.8倍,VvSnRK2.8在茎中表达水平最高,是叶片的5.0倍。0~–4℃处理后,表达水平下调幅度最小的为VvSnRK2.2,VvSnRK2.7下调幅度较大,VvSnRK2.8的表达水平为0;30℃处理后VvSnRK2.2和VvSnRK2.5上调表达,分别为对照的3.8倍和3.6倍;VvSnRK2.1和VvSnRK2.2与盐胁迫调节紧密相关,VvSnRK2.5与干旱胁迫调节密切相关。关键词:葡萄;SnRK2家族;基因克隆;荧光定量;基因表达中图分类号:S663.1文献标志码:A文章编号:0513-353X(2016)10-1891-12I
4、dentificationandExpressionProfileoftheSnRK2FamilyGenesinGrapevine*MAZong-huan,MAOJuan,LIWen-fang,YANGShi-mao,WUJin-hong,andCHENBai-hong(CollegeofHorticulture,GansuAgriculturalUniversity,Lanzhou730070,China)Abstract:FulllengthcDNAsequenceof8grapeSnRK2genes(VvSnRK2)wereclonedfromgrapev
5、ineRubySeedlessusingRT-PCR,sequenceanalysisshowedthattheN-terminaldomainofVvSnRK2washighlyconserved,whiledivergentintheC-terminal.ThephylogenyeticanalysisshowedthatVvSnRK2scouldbedividedintothreegroups.TheVvSnRK2sproteincarryallacidicaminoacidsandtheyallhydrophilicproteins.AllVvSnRK2
6、butVvSnRK2.2,VvSnRK2.8genescarry9exons.Thepredictedsecondarystructuresuggestedthatthemainstructureofeightproteinsarealphahelix,betaturnandrandomcoil.Thesubcellularlocalizationwerepredictedinthecytoplasmic.Theanalysisofcis-regulatoryelementsshowedthatVvSnRK2scontainedoneormoreofABRE,D
7、RE/CRT,LRTEelementsexceptVvSnRK2.1,VvSnRK2.2andVvSnRK2.6.Quantitativereal-timePCRdataindicatethatVvSnRK2.7andVvSnRK2.8wereexpressedatthehighest-levelintherootsandstems,whichwereas3.8and5.0timesas收稿日期:2016–07–04;修回日期:2016–09–20基金项目:国家自然科学基金项目(31460500)*通信作者Authorforcorrespondence(E-ma
8、il:bhch@gsau
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