纳米氧化铈颗粒对大鼠肺组织grp78表达的影响

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1、动物医学进展，２０１４，３５（１２）：７７－７９ＰｒｏｇｒｅｓｓｉｎＶｅｔｅｒｉｎａｒｙＭｅｄｉｃｉｎｅ纳米氧化铈颗粒对大鼠肺组织ＧＲＰ７８表达的影响杨静１，李园园２，吴刚１＊，庞一强３＊（１．包头医学院生物化学与分子生物学教研室，内蒙古包头０１４０４０；２．鄂尔多斯市卫生学校，内蒙古鄂尔多斯０１７０００；３．包头市第四医院神经外科，内蒙古包头０１４０３０）摘要：探讨不同粒径纳米氧化铈颗粒对大鼠肺组织的毒性效应及对大鼠肺组织ＧＲＰ７８蛋白表达的影响，将粒径分别为３５ｎｍ±３ｎｍ、２８７ｎｍ±２７ｎｍ的纳米氧化铈颗粒悬液以４００ｍｇ／ｋｇ剂量对大鼠灌肺。染

2、毒２８ｄ后，采用免疫组化法检测大鼠肺组织ＧＲＰ７８蛋白表达情况。结果表明，与对照组相比，不同粒径纳米氧化铈细胞ＧＲＰ７８蛋白表达均增加（Ｐ＜０．０５），且３５ｎｍ±３ｎｍ组高于２８７ｎｍ±２７ｎｍ组（Ｐ＜０．０５）。说明不同粒径纳米氧化铈均可引起大鼠肺组织ＧＲＰ７８蛋白表达增加，且粒径越小，表达越高。关键词：纳米氧化铈；肺组织；ＧＲＰ７８中图分类号：Ｓ８５２．２文献标识码：Ａ文章编号：１００７－５０３８（２０１４）１２－００７７－０３目前，纳米氧化铈已被广泛应用于紫外线吸收机分为３组，３５ｎｍ±３ｎｍ组、２８７ｎｍ±２７ｎｍ组和剂、高效抛光粉、汽车尾气净

3、化催化剂等多种工业用对照组，每组９只。染毒组大鼠以３０ｇ／Ｌ戊巴比妥途。随着我国汽车工业的发展和汽车保有量的飞速钠麻醉后，采用非暴露式气管滴注染毒，滴注量为２增加，环境中汽车尾气的排放量也必然会大幅增加，ｍＬ／ｋｇ，对照组注入等体积的生理盐水。染毒第２８而作为助催化剂的纳米氧化铈也随之排放入环境天时，３０ｇ／Ｌ戊巴比妥钠腹腔注射麻醉，取部分肺中，其暴露人群和暴露量必将日趋增加。研究显示，叶并用１００ｍＬ／Ｌ中性甲醛固定，用于后续试验。［１］小鼠经鼻吸入纳米氧化铈可导致肺损伤。而内质１．２．２病理学观察经１００ｍＬ／Ｌ甲醛溶液固定网应激在多种肺部疾病的发生

4、发展中发挥了重要的超过４８ｈ的肺组织，常规脱水，石蜡包埋、切片，苏［２］作用。研究内质网应激标志性蛋白葡萄糖调节蛋木精－伊红（ＨＥ）染色，光学显微镜下观察病理学改白－７８（ｇｌｕｃｏｓｅ－ｒｅｇｕｌａｔｅｄｐｒｏｔｅｉｎ，ＧＲＰ７８）在纳米氧变，包埋好的蜡块同时用于后期免疫组化。化铈所致肺损伤中的表达可为纳米氧化铈暴露所致１．２．３免疫组化法检测肺组织ＧＲＰ７８蛋白表达肺损伤的作用机制提供新的思路。按照文献［３］进行免疫组化操作组织切片常规脱蜡、１材料与方法水化，加入枸橼酸盐缓冲液于微波炉内进行抗原修１．１材料复，３０ｍＬ／Ｌ双氧水封闭，滴加１∶２００稀

5、释的１．１．１实验动物ＳＰＦ级健康雄性ＳｐｒａｇｕｅＤａｗ－ＧＲＰ７８一抗４℃过夜，ＰＢＳ冲洗３次，加入生物素标ｌｅｙ（ＳＤ）大鼠２７只，体重２２０ｇ～３００ｇ，购自北京维记的羊抗兔ＩｇＧ抗体室温孵育１５ｍｉｎ，ＰＢＳ冲洗３通利华实验动物技术有限公司。次，ＤＡＢ显色。苏木素轻度复染，１０ｍＬ／Ｌ盐酸－酒１．１．２仪器及试剂纳米ＣｅＯ２（３５ｎｍ±３ｎｍ、精中分化数秒，氨水返蓝数秒，梯度酒精脱水干燥，２８７ｎｍ±２７ｎｍ），购自杭州万景新材料有限公司二甲苯透明，中性树胶封固。（质量分数≥９９．９％）；兔抗大鼠ＧＲＰ７８单克隆抗体１．２．４结果分析由病理科医

6、师协助进行结果判购自北京博奥森公司；山羊抗兔ＩｇＧ、免疫组织化学定：以北京博奥森生物技术有限公司提供的阳性切ＳＰ试剂盒、ＤＡＢ显色剂均购自福州迈新公司。片作为阳性对照，以０．０１ｍｏｌ／ＬＰＢＳ液替代一抗作１．２方法为阴性对照。结果判断：胞质中出现棕黄（褐）色颗１．２．１模型建立及取材购进大鼠后先进行适应粒者为阳性细胞，ＧＲＰ７８的阳性表达指数用染色强［４］性饲养，普通饲养，自由饮水。１周后，２７只大鼠随度分数×染色细胞比例分数表示。染色强度按颜收稿日期：２０１４－０５－０２基金项目：国家自然科学基金项目（８１１６０３４１）；内蒙古自治区高等学校科学研究

7、项目（ＮＪＺＹ１３２３８）作者简介：杨静（１９８１－），女，内蒙古土左旗人，硕士，讲师，主要从事金属与生物大分子相互作用研究。＊通讯作者７８动物医学进展２０１４年第３５卷第１２期（总第２５８期）色评分：完全阴性记０分，黄色１分，棕黄色２分，棕较大，肺泡间隔增厚，肺泡腔内可见大量炎性细胞浸褐色３分；染色细胞比例按阳性细胞百分比评分：＜润，管壁充血严重，大部分肺组织形成肺实变，并有５％，５％～２４％，２５％～４９％，５０％～７４％，≥７５％异物肉芽肿形成，如图中箭头所示（图１Ｂ）。２８７ｎｍ分别评为０、１、２、３、４分。±２７ｎｍ染毒组：肺泡间隔增宽，肺泡腔

8、明显渗出，１．２．５统计学处理所有数据应用ＳＰＳＳ１９．０软并有大量炎细胞浸润（