硕士论文-联合应用载阿霉素或sirna靶向脂质体治疗耐药肿瘤的研究

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1、硕士研究生学位论文联合应用载阿霉素或siRNA靶向脂质体治疗耐药肿瘤的研究姓名：姜娟学号：90407231院（部）：药学院专业：药剂学导师：王坚成副教授完成时间：二○壹○年五月姓名：姜娟院系：药剂系学号：90407231北京大学医学部学位论文原创性声明和使用授权说明原创性声明本人郑重声明：所呈交的学位论文，是本人在导师的指导下，独立进行研究工作所取得的成果。除文中已经注明引用的内容外，本论文不含任何其他个人或集体已经发表或撰写过的作品或成果。对本文的研究做出重要贡献的个人和集体，均已在文中以明确方式标明。本声明的法律结果由本人承担。论文作者签名：导师签名：年月日学位论文使用授权说

2、明本人完全了解北京大学医学部关于收集、保存、使用学位论文的规定，即：按照学校要求提交学位论文的印刷本和电子版本；学校有权保存学位论文的印刷本和电子版，并提供目录检索与阅览服务；学校可以采用影印、缩印、数字化或其它复制手段保存论文；在不以赢利为目的的前提下，学校可以公布论文的部分或全部内容。请选择图书馆发布时间：□即时发布□一年后发布□二年后发布（保密论文需注明，并在解密后遵守此规定）论文作者签名：导师签名：年月日北京大学硕士学位论文联合应用载阿霉素或siRNA靶向脂质体治疗耐药肿瘤的研究联合应用载阿霉素或siRNA靶向脂质体治疗耐药肿瘤的研究中文摘要肿瘤耐药是临床化疗失败的主要原

3、因之一，逆转肿瘤多药耐药性已经成为肿瘤治疗的难点和热点。经典的耐药机制是耐药基因（MDR1）相关的P-糖蛋白（P-glycoprotein，P-gp）介导的肿瘤多药耐药。在早期研究报道中，利用P-gp底物抑制剂，如维拉帕米、环孢素等小分子化合物，进行肿瘤耐药性的逆转，但由于这些小分子缺乏特异性，毒性大，因此其临床应用受到很大限制。相比小分子化合物，RNA干扰技术在针对调控肿瘤耐药蛋白水平上具有特异性高、持续时间长、毒性低的优势。因此，利用小干扰RNA（siRNA）来实现肿瘤耐药逆转已经被越来越多的研究者所青睐，并且已经在体外细胞和部分体内试验研究中得以证实。然而，由于小干扰RNA

4、（siRNA）是一类水溶性大分子，具有分子量大、带负电荷、易被核酶降解、膜渗透性差、体内半衰期短、组织分布差等性质，简单使用游离siRNA根本无法实现体内外的基因沉默效应。因此，探索和开发一种能有效改善siRNA递送问题并且生物相容性好的输送系统是一项具有重大意义的研究。本研究分别构建了RGD修饰的隐形阳离子脂质体和RGD修饰的隐形中性脂质体作为siRNA和阿霉素的输送载体（RGD-lipo和RGD-SSL）。硫酸铵梯度法制备的RGD修饰的阿霉素脂质体（RGD-SSL-DOX）平均粒径在100nm左右，阿霉素的包封率在95%以上。RGD修饰的阳离子脂质体与siRNA利用静电结合方

5、式形成的阳离子脂质体复合物(RGD-lipo-siRNA)平均粒径在200nm以内，粒径分布均匀。采用人乳腺癌细胞MCF7/A作为耐药肿瘤细胞模型，考察了RGD-lipo对细胞的靶向结合能力和载siRNA的转染效率。体外细胞实验结果表明RGD-lipo能促进细胞对siRNA的摄取，并有利于siRNA在细胞浆中均匀分布；RGD-SSL-DOX和RGD-lipo-siRNA对细胞联合给药后发现DOX和siRNA各自主要分布于细胞核和I北京大学硕士学位论文联合应用载阿霉素或siRNA靶向脂质体治疗耐药肿瘤的研究细胞浆中，与各自单独给药相比，细胞摄取行为并无明显变化。采用人乳腺癌细胞MC

6、F7/A作为耐药肿瘤细胞模型，考察比较各种不同载体与P-gp相关的MDR1siRNA形成的阳离子脂质体复合物对MCF7/A的耐药水平的逆转效果，逆转能力强弱顺序为：1%RGD-lipo-siRNA>2%PEG-lipo-siRNA>2%RGD-lipo-siRNA。体外细胞实验结果表明，这些siRNA脂质体均能在一定程度上增加阿霉素在耐药细胞内的累积，提高耐药细胞对阿霉素的敏感度，从而逆转细胞耐药。在对RGD修饰比例筛选时发现，过高比例的PEG会阻碍细胞摄取，影响转染效率，进而降低对耐药细胞的疗效，结果显示1%RGD-lipo-siRNA（MDR1）的耐药逆转效果最佳。以接种了人

7、乳腺癌细胞MCF7/A的Balb/c裸鼠作为模型，采用活体成像技术考察了RGD修饰的阿霉素脂质体和siRNA脂质体复合物体内静脉注射方式联合给药后的组织分布情况以及肿瘤组织靶向性。荧光成像检测结果显示，阿霉素脂质体和siRNA脂质体复合物经RGD修饰后可达到同靶输送的效果，从各脏器组织分布情况来看，DOX和siRNA均可靶向输送到肿瘤部位，这一结果提示RGD修饰将有利于两种药物联合静脉注射给药时能实现同部位靶向目标，将有利于DOX和siRNA两种药物在耐药肿瘤治疗过程中产生协同效