电穿孔介导马尔尼菲青霉转化体系的建立和优化

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1、·12·中国真菌学杂志2014年2月第9卷第1期ChinJMycol，February2014，Vol9，No．1·论著·电穿孔介导马尔尼菲青霉转化体系的建立和优化12111陈阳霞顾桉菁梁宇恒马团席丽艳(1．中山大学孙逸仙纪念医院，广州510120;2．贵阳医学院基础医学院，贵阳550004)【摘要】目的建立和优化马尔尼菲青霉电穿孔转化体系，为其基因功能研究提供良好平台。方法直接使用马尔尼菲--青霉缺陷株SPM4(pyrG，niaD)萌发孢子进行电穿孔转化，并通过改变孢子龄、孢子萌发时间、质粒浓度、电场强度等影响因素对体系进行优化。结果适合SPM4电穿孔转化

2、条件为:孢子龄为6d，孢子萌发时间为4h，电场强度为5kV/cm。上述条件下分别使用1μg环状或线性化质粒DNA转化SPM4，平均可得到21个和13个转化子。结论马尔尼菲青霉电穿孔转化效率高，重复性好，针对SPM4萌发孢子，环状质粒较线性化质粒电穿孔转化效率高。【关键词】马尔尼菲青霉;萌发孢子;电穿孔【中图分类号】Ｒ379．9【文献标识码】A【文章编号】1673-3827(2014)09-0012-04Electroporation-mediatetransformationofPenicilliummarneffeiandoptimizationofthe

3、transformingconditions12111CHENYang-xia，GUAn-jing，LIANGYu-heng，MATuan，XILi-yan(1．DepartmentofDermatology，SunYat-senMemorialHospital，SunYat-senUniversity，Guangzhou510120，China;2．CollegeofBasicMedicine，GuiyangMedicalUniversity，Guiyang550004，China)【Abstract】ObjectiveToestablishandopti

4、mizetheelectroporation-mediatedtransformationsystemforPenicilliummarneffei．ItwouldprovideagoodplatformforthegenefunctionresearchofP．marneffei．MethodTheselectablemarkerpyrGgenewastrans---formedintothegerminatedsporesofPenicilliummarneffeistrainSPM4(pyrG，niaD)byelectroporationmethod．

5、Itaimedatfindingouttheoptimalprotocolbychangingsomeimportanteffectingfactorsincludingsporestadium，germinationtime，electricfieldintensity，andsoon．ＲesultsTheappropriateelectroporationconditionsforSPM4wereasfollows:sporestadium6d，germinationtime4handelectricfieldintensity5kV/cm．Undert

6、heseconditions，21and13transformantswereobtainedusing1μgcircularandlinearizedplasmidDNA，separately．ConclusionElectroporation-mediatetransformationofPenicilliummarneffeicangethightransformationefficiencyandrepeatability．Itisimpliedthatcircularplasmidgothighertransformationfrequencyth

7、anthelinearizedbyelectroporationforthegerminatedsporesofSPM4．【Keywords】Penicilliummarneffei;germinatedspores;electroporation［ChinJMycol，2014，9(1):12-15］马尔尼菲青霉是一种双相型真菌，室温培养时细胞，是研究真核细胞基因功能常用的方法。丝状以菌丝形态生长，37℃培养或感染人体后以酵母细真菌常用的转化方法有原生质体法、醋酸锂法、农胞形态生长，感染人体后可引起一种严重的深部真杆菌介导法、电穿孔法和生物弹道技术等。其中

8、最菌病，该病在免疫受损患者尤其是HIV感染患者常用的