银杏类黄酮3’+羟化酶基因的克隆与表达分析

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1、园艺学报，2015，42(4)：643–654.ActaHorticulturaeSinicadoi：10.16420/j.issn.0513-353x.2014-0822；http：//www.ahs.ac.cn643银杏类黄酮3’羟化酶基因的克隆与表达分析1,3,*1,3,*1,31,2,**李琳玲，程华，陈小玲，程水源12（经济林木种质改良与资源综合利用湖北省重点实验室，湖北黄冈438000；武汉轻工大学生物与制药工程学院，3武汉430023；黄冈师范学院生命科学学院，湖北黄冈438000）摘要：利用简并PCR和RACE

2、技术从银杏叶片中分离到黄酮3’羟化酶基因GbF3’H的cDNA全长序列（GenBankNo.：KP056747）。其全长为2144bp，含有一个1671bp的开放式阅读框（ORF），编码556个氨基酸序列，预测氨基酸大小为63.47kD，等电点为7.71。蛋白质同源序列分析表明，GbF3’H与其他物种F3’H同源性较低，而与菊苣（Cichoriumintybus）同源性最高，为56.3%。同源建模分析显示GbF3’H与P450家族蛋白的三维结构及活性位点高度相似，最终定位于微粒体膜上。进化树分析结果显示GbF3’H与其他植物分

3、化较早，序列差异较大。组织表达分析显示，GbF3’H在银杏不同组织中都有表达，其中雄蕊表达水平最高，其次为成熟叶。诱导表达分析显示，GbF3’H转录水平受UV-B、6-BA、SA、ABA和IAA影响诱导上调，而伤害处理对其表达量无明显影响。GbF3’H诱导表达模式与调控银杏黄酮含量变化呈正相关，其上游调控序列存在与黄酮调控相关的顺式元件，意味着GbF3’H可能参与了银杏黄酮类物质的合成代谢，并与黄酮类物质向花青素合成分流有关。关键词：银杏；类黄酮3’羟化酶；黄酮；表达调控中图分类号：S664.3文献标志码：A文章编号：0513

4、-353X（2015）04-0643-12MolecularCloning，CharacterizationandExpressionofFlavonoid3’Hydroxylase-likeProteinGenefromGinkgobiloba1,3,*1,3,*1,31,2,**LILin-ling，CHENGHua，CHENXiao-ling，andCHENGShui-yuan1（EconomicForestGermplasmImprovementandComprehensiveUtilizationofResource

5、sofHubeiKeyLaboratories2Huanggang，Hubei438000，China；WuhanPolytechnicUniversity，SchoolofBiologyandPharmaceuticalEngineering，3Wuhan430023，China；CollegeofLifeScience，HuanggangNormalUniversity，Huanggang，Hubei438000，China）Abstract：Thefull-lengthcDNAsequencesofF3’Hgene（de

6、signatedasGbF3’H）wereisolatedfromGinkgobilobaforthefirsttime，GenBankNo.KP056747.Thefull-lengthcDNAofGbF3’His2144bplongandcontainsa1671bpopenreadingframe（ORF）encodinga556aminoacidprotein，withapredictedmolecularweightofabout63.47kDandanisoelectricpointof7.71.Phylogene

7、tictreeanalysisrevealedthatGbF3’HsharedthesameancestorwithotherF3’H，butthedivergencetimeisearly.BioinformaticsanalysisshowthatGbF3’HhaveasignalrecognitionpeptideandbelongtoamicrosomalcytochromeP450-dependentmonooxygenasesmultigenefamilies.TheexpressionanalysisbyRT-P

8、CRshowedthatGbF3’HhadtissuespecificmannerinG.biloba，andthehighestexpressioninstamens，the收稿日期：2014–11–02；修回日期：2015–04–07基金项目：国家自然科学基金项目（314