知母提取物对马铃薯晚疫病防治作用机制及其抑菌活性成分研究硕士论文

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1、河北农业大学硕士学位论文知母提取物对马铃薯晚疫病防治作用机制及其抑菌活性成分研究姓名：宋风平申请学位级别：硕士专业：农药学指导教师：曹克强；王树桐；胡同乐2009-06-08摘要本论文以中草药知母为材料，研究了知母提取物对马铃薯晚疫病菌的抑制作用，对知母的有效成分进行了分离纯化和鉴定，并研究了有效成分芒果苷对马铃薯晚疫病菌的作用机制。论文首先测试了知母提取物对马铃薯晚疫病菌的抑菌作用，结果表明，知母提取物对马铃薯晚疫病菌的菌丝生长和游动孢子释放有很好的抑制作用，对菌丝生长和游动孢子释放的抑制中浓度分别为1673.64µg/mL、1185.28µg/mL。对水提醇沉法

2、得到的知母多糖进行了生物活性测定，结果显示，知母粗多糖对马铃薯晚疫病菌菌丝生长抑制作用较差，其EC50值为8058.29µg/mL；对游动孢子释放有较好的抑制作用，其EC50值为2235.64µg/mL。将粗多糖进行纯化分离，用Sevag法脱蛋白，纯化后的多糖对游动孢子的抑制作用显著提高，其EC50值为415.22µg/mL。利用饱和硫酸铵沉淀法提取蛋白，透析，包埋得到粗蛋白，经过生物测定，结果表明，粗蛋白对马铃薯晚疫病菌无明显的抑制作用。对去除粗多糖后的知母提取物中其他活性成分进行了进一步分离和纯化。通过硅胶柱色谱、半制备型高效液相色谱分离，甲醇重结晶，获得了淡黄

3、色结晶体。利用紫外光谱、红外光谱、核磁共振等波谱手段对该活性成分进行结构鉴定，确定该活性成分为芒果苷。室内生物活性测定结果表明，芒果苷对马铃薯晚疫病菌（Phytophthorainfestans）的菌丝生长和游动孢子释放均有较强的抑制作用，其EC50值分别为32.65μg/mL和100.97μg/mL。本文初步研究了芒果苷对马铃薯晚疫病菌的作用机制，研究结果表明，芒果苷对晚疫病菌菌丝体的蛋白质合成有一定的抑制作用；在浓度大于50μg/mL时，芒果苷对晚疫病菌菌丝体细胞膜的通透性影响随浓度的增加而增大，使菌丝体细胞膜电导率明显增大。呼吸代谢抑制试验结果显示：芒果苷对马

4、铃薯晚疫病菌呼吸代谢的糖酵解途径（EMP）、三羧酸循环（TCA）、磷酸戊糖途径（HMP）均有抑制作用，其中对HMP途径的抑制作用最明显。关键词：知母；芒果苷；多糖；马铃薯晚疫病菌；作用机制StudyonActiveIngredientsandControlMechanismsofAnemarrhenaasphodeloidesExtractsagainstPhytophthorainfestansAuthor:SongFeng-pingAdvisers:ProfessorCaoKe-qiangAssociateprofessorWangShu-tongAssocia

5、teprofessorHuTong-leSpecialty:PesticideScienceAbstractThecontroleffectsofAnemarrhenaasphodeloidesextractagainstPhytophthorainfestanswereinvestigatedandtheactiveingredientsinvulvedwereseparated,purifiedandidentified.Moreover,thecontrolmachanismsofmangiferinonPhytophthorainfestanswasalso

6、conducted.InhibitionofAnemarrhenaasphodeloidesBungeextract(AAE)onPhytophthorainfestanswastestedinvitro.Theresultsshowedthattheeffectiveconcentration(EC50)valuesofAAEagainstmyceliumgrowthandzoosporereleasewere1673.64mg/mLand1185.28µg/mL,respectively.Thebioassaytestsinvitroshowedthatpoly

7、saccharidederivedfromthewater-extractionandalcohol-precipitationmethodhavenoobviouseffectonthemyceliumgrowthofPhytophthorainfestanswithEC508058.29μg/mL.IthasarelativelysignificantinhibitoryeffectonthezoosporereleaseofPhytophthorainfestanswithEC502235.64μg/mL.Afterpurificationofpolysa