马铃薯α-茄碱对灰葡萄孢菌的体外抑菌活性研究

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1、内蒙古农业大学研究生学位论文独创声明本人申明所呈交的学位论文是我本人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。据我所知，除了文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包括其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包括为获得我校或其他教育机构的学位或证书而使用过的材料，与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示谢意。申请学位论文与资料若有不实之处，本人承担一切相关责任。论文作者签名：刭∑盈．玲日内蒙古农业大学研究生学位论文版权使用授权书本人完全了解内蒙古农业大学有关保护知识产权的规定，即：研究生在攻读学位期间论文工作的知识产权单位属内蒙古农业大学

2、。本人保证毕业离校后，发表论文或使用论文工作成果时署名单位为内蒙古农业大学，且导师为通讯作者，通讯作者单位亦署名为内蒙古农业大学。学校有权保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和电子文档，允许论文被查阅和借阅。学校可以公布学位论文的全部或部分内容(保密内容除外)，采用影印、缩印或其他手段保存论文。摘要本试验用0．5％的硫酸浸提和28％的氨水沉淀的方法从马铃薯皮中提取糖苷生物碱(TGA)，并采用柱层析和薄层层析的方法纯化分离出洳茄碱(a-solanine)，以0L．茄碱为试验材料，灰葡萄孢菌(Botrytiscinerea)为供试菌种，采用平板涂布法测定洳茄碱对灰葡萄

3、孢菌的最小抑菌浓度(MIC)和最小杀菌浓度(MFC)，菌丝生长速率法测定抑制率和半数效应浓度(ECso)。并通过牛津杯法研究了a．茄碱体外抑制灰葡萄孢菌的影响因素(pn值、热处理、金属盐)，在此基础上对a．茄碱的抑菌机制和机理进行初步研究。主要研究结果如下：(1)试验采用0．5％的硫酸浸提和28％的氨水沉淀的方法从马铃薯皮中提取糖苷生物碱，得粗样质量为1．38mg／g。通过薄层层析法(展开剂为氯仿·甲醇-2％氨水(70：30：5，v／v)，显色剂为5％的硫酸乙醇液)鉴定，以硅胶为吸附剂，乙酸乙酯-95％乙醇．10％氨水(80：30：4，v／v)洗脱部位得到洳茄碱单体，Q

4、-茄碱的Rf值为0．38(与标准品一致)。洗脱液旋转蒸发得肚茄碱。一(2)采用平板涂布法测定17,．茄碱对灰葡萄孢菌的MIC是12．5“mol／L，MFC是18．75tunol／L。通过菌丝生长速率法测定洳茄碱对灰葡萄孢菌的抑制率及ECso值，得出：舡茄碱浓度为18．75时，其对灰葡萄孢菌的抑制率达到93．24％，0L-茄碱的ECso值为7．24Ipmoi／L．(3)采用牛津杯法测定不同浓度的a．茄碱对灰葡萄孢菌的体外抑制效果，结果表明：当弘茄碱的浓度为501xmoi／L时，其对灰葡萄孢茵表现出高度敏感性，且随着a．茄碱浓度的增加，敏感度增加。故本试验选取50pmol／

5、L为Gt．茄碱对灰葡萄孢菌的最适抑菌浓度。在最适浓度下研究a．茄碱的抑菌活性受到pH、热处理温度和时间、金属盐的影响。当a．茄碱溶液的pH值为7时，对灰葡萄孢菌的抑制效果最好；对a．茄碱进行热处理会影响其对灰葡萄孢菌的抑制效果，当加热温度不超过80℃时，其抑菌效果具有良好的稳定性，尤其当温度不超过60。C时，随着加热时间的延长，其抑茵圈直径变化小于1mm；当加热温度升至80"C，其抑菌圈直径随温度增加和时间延长而缩小；浓度为0．25％、0．5％、l％、2％署fl3％的NaCI、MgS04、CaCl2和KCI均能加强0c．茄碱对灰葡萄孢菌的抑制效果，且在此浓度范围内随金属

6、盐浓度增大，c【．茄碱的抑菌直径增大，效果增强。(4)由u．茄碱对灰葡萄孢菌作用后的转移实验得出结论：0L．茄碱对灰葡萄孢菌的作用方式与它的浓度和作用时间有关，6．25pmol／L和12．51amol／L的0【．茄碱与灰葡萄孢菌接触3d，对其起仅抑制作用：6．259mol／L和12．51amol／L的0t．茄碱与灰葡萄孢菌接触6d、12d和18．75}tmol／L的0t．茄碱与灰葡萄孢菌接触3d、6d、12d，对其均有杀灭作用。通过对不同浓度的0【．茄碱对灰葡萄孢菌孢子抑制的速率和持续时间的测定得出结论：18．751．tmol／L和25pmol／L的Q一茄碱对灰葡萄孢菌

7、孢子的杀灭时间分别为lOh和8h。在含有不同浓度叶茄碱的PDB体培养基中生长的灰葡萄孢的细胞外渗率均有升高，且差异显著。关键词：小茄碱；灰葡萄孢菌：体外抑菌；牛津杯法；抑菌机制机理StudiesonAntimicrobialActivitiesofPotato0【一solanine·AgainstBotrytisCinereainVitroAbstractGlycoalkaloidextractedfrompotatoskinswith5％sulfuricacidsoakingextractingandprecipitatedwith28