太平洋牡蛎类fut2基因的克隆与组织表达

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1、第35卷第5期渔业科学进展Vol.35,No.52014年10月PROGRESSINFISHERYSCIENCESOct.,2014DOI:10.11758/yykxjz.20140510http://www.yykxjz.cn/太平洋牡蛎(Crassostreagigas)类FUT2基因的*克隆与组织表达1,2222姜薇姚琳江艳华李风铃122①牟海津刘慧翟毓秀(1.中国海洋大学食品科学与工程学院青岛266003；2.农业部水产品质量安全检测与评价重点实验室中国水产科学研究院黄海水产研究所青岛266071)摘要通过同源克隆的方法获得太平洋牡蛎(Crassostreagigas)类FUT2基因的

2、cDNA序列，分析其在牡蛎中的组织表达差异。研究结果表明，太平洋牡蛎类FUT2基因cDNA全长为1941bp，包含180bp的5非翻译区、1086bp的编码361个氨基酸的开放阅读框及675bp的3非翻译区。分子进化聚类分析结果显示，太平洋牡蛎类FUT2基因与家鼠(Musmusculus)等哺乳动物的FUT2基因聚为1个分支。此外，类FUT2基因mRNA在太平洋牡蛎成贝的肝胰脏、闭壳肌、外套膜、唇瓣、鳃等5个组织中均有分布，其中在唇瓣中的表达量最低，在其余4个组织中的表达量差异不显著。本研究表明，牡蛎中类A型组织血型抗原HBGA很可能存在与人A型HBGA相似的合成途径，可为进一步探索牡蛎特

3、异性富集诺如病毒NoV的分子机制奠定研究基础。关键词太平洋牡蛎；类FUT2基因；克隆；组织表达中图分类号S917文献标识码A文章编号1000-7075(2014)05-0070-06诺如病毒(Norovirus，NoV)是引起人类非菌性急用被NoV污染且加热不彻底的牡蛎常引起NoV的感性肠胃炎的主要病原(Danielsetal,2000)，其感染引染(Tianetal,2006；柳淑芳等,2009)，为水产品质量起的病例占病毒性肠胃炎的90%(Chatterjeeetal,及食用安全带来隐患。LeGuyader等(2006)与Tian等2004；Green,1997)。NoV可识别人类组织血型

4、抗原(2006)发现牡蛎中存在类A型HBGA，并确定类A型(Histo-bloodgroupantigens,HBGAs)，并将其作为连HBGA作为受体介导牡蛎肠胃细胞特异性吸附NoV，接的配体或受体感染人类(Marionneauetal,2002；为研究牡蛎特异性富集NoV的分子机理拓展了新的Huangetal,2003；Hutsonetal,2003)。在人类HBGAs研究视野。根据牡蛎类A型HBGA与人类HBGAs合成过程中，FUT2(Fucosyltransferase2，α-1,2-岩藻结构的相似性，推测牡蛎中也存在类似于人类FUT2糖基转移酶)将岩藻糖基转移到I型链(β-1,3-糖

5、苷键的酶以合成类A型HBGA，但尚未见国内外有关该连接的前体物质)半乳糖残基末端形成H抗原，随后酶及相关基因的研究报道。A酶(α-1,3-N-乙酰半乳糖胺基转移酶)将GalNAc转移本研究通过cDNA末端快速扩增技术(RACE)克到H抗原Gal残基末端，形成A型抗原(Shirato,隆牡蛎类FUT2基因，分析其序列特征，并通过实时2012)。因此，FUT2是A型HBGA合成的关键酶之一。荧光定量RT-PCR的方法分析其组织表达特性，为深牡蛎(Crassostreagigas)能够特异性富集NoV，食入开展牡蛎特异性富集诺如病毒的分子机理研究奠*国家自然科学基金(31101883)和山东省优秀中

6、青年科学家科研奖励基金计划项目(BS2010SW041)共同资助。姜薇，E-mail:jiangweiysfri@163.com①通讯作者：翟毓秀,研究员,E-mail:zhaiyx@ysfri.ac.cn收稿日期:2014-03-10,收修改稿日期:2014-04-23第5期姜薇等:太平洋牡蛎(Crassostreagigas)类FUT2基因的克隆与组织表达71定基础。FMF/FMR各1.0μl，25.0mmol/LMgCl22.0μl，10×PCRbuffer2.5μl，5U/μlTaqDNA聚合酶0.2μl，1材料与方法cDNA模板5.0μl，ddH2O补足体系至25.0μl。PCR扩增

7、条件：95℃5min；95℃1min，58−48℃45s，72℃1.1材料40s，10个循环，每个循环退火温度降低1℃；95℃实验用太平洋牡蛎于2012年11月在山东省威海1min，53℃45s，72℃40s，25个循环；72℃5min。乳山市海阳所镇杜家养殖场采集，解剖后获得肝胰PCR产物经0.8%琼脂糖凝胶电泳后，用琼脂糖脏、鳃等组织，迅速保存于液氮中。凝胶DNA回收试剂盒对目的片段纯化，纯化