中药材佛手的种质资源及遗传多样性研究硕士论文

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1、中山大学硕士学位论文中药材佛手的种质资源及遗传多样性研究姓名：郝大庆申请学位级别：硕士专业：植物学指导教师：廖文波20090606中药材佛手的种质资源及遗传多样性研究专业：植物学姓名：郝大庆指导教师：廖文波教授摘要佛手(Buddha’sHa耐citron)，学名Cffr“s聊e旃c口L．VaLs口肋如c彬括(Noot．)Sw崦le，为芸香科柑橘属植物香橼(CffM聊P班∞L．)的变种，十大广药之一，是传统的名贵中药。佛手不仅可供药用，还可发展佛手盆景市场，其挥发油可应用于食品和化妆品等方面，因而具有很大

2、的开发利用价值。但由于长期以来粗放种植，致使品种混杂、退化，病虫害严重，产量和品质参差不齐，严重妨碍了佛手产业的规范化种植和质量控制。本文从植株形态、SSR分子标记两方面对采自浙江金华，重庆南龙，广东肇庆、高要、武垄、潮州、梅州、汕头(来自新加坡)等共八个地方的佛手进行分析，以研究其各种质间的亲缘关系，为佛手GAP规范化种植提供有益的技术支持。从叶片气孔器特征和花粉两方面研究三种佛手的形态差别，观察和测量了40枚叶片的气孔器和50粒花粉的形状和大小，发现来自浙江、重庆、广东三个佛手品种，在气孔器和花粉形

3、态特征上比较一致，差异较小。利用Fastprep法成功提取了3省8个佛手居群的基因组DNA，结果发现从当年生已完全展开的叶片提取的DNA质量和得率都较好，完全满足实验需要。利用汕头(来自新加坡)和浙江金佛手群体中的植株DNA，从53对SSR引物中筛选出5对可以扩增出条带清晰、多样性高、反应稳定的引物。其中，CCSM3的扩增产物多态性最高，可以扩增出4条在各居群内具有多样性的条带。其次为P1223可以扩增出3条在各居群内具有多样性的条带。CCSMl9和CCSMl2这两对引物只能分辨出汕头的佛手个体，多样性

4、最低。在扩增过程中建立了优化的20“l体积的SSR反应体系和PCR反应程序。利用筛选出的5对SSR引物对8个居群的122个个体进行研究，共发现13Ⅲ个等位基因。采自汕头(种源来自新加坡)的多样性最高，其香农指数，、观测杂合度Z汤、期望杂合度胁分别为O．648、0．733、0．547。其次为广佛手潮州的居群。广佛手高要和川佛手重庆群体的多样性最低，其香农指数厶观测杂合度胁、期望杂合度胁都为O，所用引物未能在这两个居群中得到具有多态性的条带。广佛手其余各群体多样性相近。推测佛手群体尤其是我国佛手遗传多样性很

5、低的原因可能是在约700年的栽培历史中，长期营养繁殖、人工选择以及缺乏野生种质交流，导致佛手种质的遗传多样性流失严重，遗传基础变得很窄，基因趋于纯合。F统计显示佛手出现了较高的群体间遗传分化(鼢=O．277)，群体间基因流小于l(№=O．726)也证实了这一结论。采用Mantel统计学检验，比较遗传距离和地理距离的相关性，结果显示佛手群体间的遗传距离和地理距离相关性很高(r=0．903)，但显著度很低(P-0．993)，结果不可靠。这与本实验的采样主要集中于广东境内，未采到分布于东南亚等地的佛手居群有关

6、。而且国内近年来，佛手干片和鲜果价格持续走低，很多种植户将佛手砍掉，改种其它经济作物，造成采样困难。本文的研究结果显示：我国佛手种质资源的遗传多样性较低，远远低于新加坡的佛手种质的遗传多样性。研究的佛手群体可明显的分为3大类：采自广东汕头(来自新加坡)的自成一支，与其它种群的遗传距离较大；广佛手5个群体与重庆采的川佛手亲缘关系很近，一共6个居群构成一支；金佛手自成一支，介于新加坡分支和由广佛手、川佛手共同构成的分支之间。推测川佛手很可能是由广佛手传播到当地，在长期的栽培历史中在人工选育下形成的。而广佛手

7、则可能与金佛手来自同一种源，都是来自东南亚国家。关键词：佛手形态特征SsR遗传多样性ⅣStudyonGemplasmResourcesandGeneticDiVersityofa护淞所e西c口var．s口聊如c加觑s(Noot．)Swingle【／。Z力。ZZS所edZC口Var．。S口聊口口C砂Z扰SL上NOOL夕3Wlng王eM旬or：BotanyNanle：HaoDaqiI嗨SuperviSor：Pro￡LiaoWerll)0AbstractC泐‘螂研P坊亡口var．舳咒Dd∞句P，螂(Noot．

8、)SwiIlglc(Buddha．sHalldcitron)isa丘agraIltcitronVariety，who∞劬itissegInemed缸ofmger-m(esecti0Ils．Buddha’sHaIldcitron觚itsusuaUyIIlature劬mlate伍lltoearlyw硫er．ThesⅡced，driedpeelofyellow劬itispresCribed∞atonjcintrad“iomlmedicm．舢so，