三个hta基因植物表达载体的构建及其转化鉴定

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1、２０１４年６月甘肃农业大学学报第４９卷第３期５３～５９ＪＯＵＲＮＡＬＯＦＧＡＮＳＵＡＧＲＩＣＵＬＴＵＲＡＬＵＮＩＶＥＲＳＩＴＹ双月刊三个ＨＴＡ基因植物表达载体的构建及其转化鉴定张嘉航１，魏小红１，高彩霞２（１．甘肃农业大学生命科学技术学院，甘肃兰州７３００７０；２．中国科学院遗传与发育生物学研究所，植物细胞与染色体工程重点实验室，北京１００１０１）摘要：通过ＰＣＲ扩增，将二穗短柄草基因Ｂｒａｄｉ１ｇ２５３９０（ＢｄＨＴＡ１１）、Ｂｒａｄｉ１ｇ２５４００（ＢｄＨＴＡ１２）与拟南芥基因Ａｔ１ｇ５４６４０（ＡｔＨＴＡ１４）连接到植物表达载体ｐＢＩＮＰＬＵＳ的多克隆位点，分别构成３个重组载体ｐ

2、ＢＩＮＰＬＵＳ－ＢｄＨＴＡ１１、ｐＢＩＮＰＬＵＳ－ＢｄＨＴＡ１２和ｐＢＩＮＰＬＵＳ－ＡｔＨＴＡ１４，载体ｐＢＩＮＰＬＵＳ由烟草花叶病毒３５ｓ启动子启动目的基因的表达．采用农杆菌侵染拟南芥花序的转化方法，将这３个基因转化到拟南芥ｒａｔ５突变体中，经过筛选获取转基因植株．经半定量ＲＴ－ＰＣＲ分析，初步确定目的基因已经整合到拟南芥ｒａｔ５突变体基因组中并过量表达．关键词：二穗短柄草；ＨＴＡ基因；载体构建；ｒａｔ５中图分类号：Ｑ７８文献标志码：Ａ文章编号：１００３－４３１５（２０１４）０３－００５３－０７DOI:10.13432/j.cnki.jgsau.2014.03.011Ｃｏｎｓｔｉｔｕ

3、ｔｉｏｎｏｆｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｐｌａｓｍｉｄｓａｎｄｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎｏｆｔｒａｎｓｆｏｒｍａｔｉｏｎｏｆｔｈｒｅｅＨＴＡｐｌａｎｔｇｅｎｅｓ１，ＷＥＩＸｉａｏ－ｈｏｎｇ１，ＧＡＯＣａｉ－ｘｉａ２ＺＨＡＮＧＪｉａ－ｈａｎｇ（１．ＣｏｌｌｅｇｅｏｆＬｉｆｅＳｃｉｅｎｃｅａｎｄＴｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，ＧａｎｓｕＡｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｌａｎｚｈｏｕ７３００７０，Ｃｈｉｎａ；２．ＳｔａｔｅＫｅｙＬａｂｏｒａｔｏｒｙｏｆＰｌａｎｔＣｅｌｌａｎｄＣｈｒｏｍｏｓｏｍｅＥｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ，ＩｎｓｔｉｔｕｔｅｏｆＧｅｎｅｔｉｃｓａｎｄＤｅｖｅｌ

4、ｏｐｍｅｎｔａｌＢｉｏｌｏｇｙ，ＣｈｉｎｅｓｅＡｃａｄｅｍｙｏｆＳｃｉｅｎｃｅｓ，Ｂｅｉｊｉｎｇ１００１０１，Ｃｈｉｎａ）Ａｂｓｔｒａｃｔ：ＴｈｅｇｅｎｅｓｏｆＢｒａｃｈｙｐｏｄｉｕｍｄｉｓｔａｃｈｙｏｎＢｄ１ｇ２５３９０（ＢｄＨＴＡ１１），Ｂｄ１ｇ２５４００（ＢｄＨＴＡ１２）ａｎｄａｒａｂｉｄｏｐｓｉｓｇｅｎｅＡｔ１ｇ５４６４０（ＡｔＨＴＡ１４）ｃｏｎｎｅｃｔｅｄｔｏｔｈｅｍｕｌｔｉｐｌｅｃｌｏｎｉｎｇｓｉｔｅｏｆＰＢＩＮＰＬＵＳｂｙＰＣＲ．Ｔｈｉｓｃｏｎｓｔｉｔｕｔｅｄｔｈｒｅｅｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔｖｅｃｔｏｒｓ－ｐＢＩＮＰＬＵＳ－ＢｄＨＴＡ１１，ｐＢＩＮＰＬＵＳ－ＢｄＨＴＡ１２

5、ａｎｄｐＢＩＮＰＬＵＳ－ＡｔＨＴＡ１４．ＡｎｄｔｈｉｓｐＢＩＮＰＬＵＳｗａｓｅｘｐｒｅｓｓｅｄｂｙｔｈｅｔｏｂａｃｃｏｍｏｓａｉｃｖｉｒｕｓ３５ｓｐｒｏｍｏｔｅｒｔｏｄｒｉｖｅｔａｒｇｅｔｇｅｎｅｓ．ＴｈｅｔｈｒｅｅｇｅｎｅｓｗｅｒｅｔｒａｎｓｆｏｒｍｅｄｉｎｔｏＡｒａｂｉｄｏｐｓｉｓｒａｔ５ｍｕｔａｎｔｂｙｔｈｅｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙｏｆａｇｒｏｂａｃｔｅｒｉｕｍｉｎｆｅｃｔｉｎｇＡｒａｂｉｄｏｐｓｉｓｔｈａｌｉａｎａｉｎｆｌｏｒｅｓｃｅｎｃｅ．Ｔｒａｎｓｇｅｎｉｃｐｌａｎｔｓｗｅｒｅｓｃｒｅｅｎｅｄｏｕｔ，ｗｈｉｃｈｗａｓｄｅｔｅｒｍｉｎｅｄｐｒｅｌｉｍｉｎａｒｉｌｙｔｈａｔｔｈｅｔ

6、ａｒｇｅｔｇｅｎｅｓｈａｄｂｅｅｎｉｎｔｅｇｒａｔｅｄｉｎｔｏＡｒａｂｉｄｏｐｓｉｓｒａｔ５ｍｕｔａｎｔｇｅｎｏｍｅａｎｄｏｖｅｒｅｘ－ｐｒｅｓｓｉｎｇｂｙｓｅｍｉ－ｑｕａｎｔｉｔａｔｉｖｅＰＣＲ．Ｋｅｙｗｏｒｄｓ：ｂｒｏｃｈｙｐｏｄｉｕｍｄｉｓｔａｃｈｙｏｎ；ＨＴＡｇｅｎｅ；ｖｅｃｔｏｒｃｏｎｓｔｒｕｃｔｉｏｎ；ｒａｔ５二穗短柄草是研究小麦等基因庞大复杂农作物性状与小麦、大麦等早熟禾亚科植物高度相似，并且的理想模式植物，它的基因组序列和很多重要农艺与小麦一样具有二倍体、四倍体和六倍体等多倍体第一作者：张嘉航（１９８３－），女，硕士研究生，研究方向为发育生物学．Ｅ－ｍａｉｌ：ｊｉａｈａ

7、ｎｇｚ１９８３＠１６３．ｃｏｍ通信作者：高彩霞，女，研究员，博士，主要从事禾谷类植物遗传转化方法以及重要功能基因的分子生物学研究．Ｅ－ｍａｉｌ：ｃｘｇａｏ＠ｇｅｎｅｔｉｃｓ．ａｃ．ｃｎ基金项目：国家自然科学基金项目（３１０７１４７９／Ｃ１３０６）．收稿日期：２０１３－０４－１５；修回日期：２０１３－０７－２７５４甘肃农业大学学报２０１４年［１－３］资源．２０１０年２月，二穗短柄草二倍体自交系１材料与方法ＢＤ２１测序结果的发布（Ｔｈｅｉｎｔｅｒｎ