三个HTA基因植物表达载体的构建及其转化鉴定-论文.pdf

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1、2014年6月甘肃农业大学学报第49卷第3期53~59JOURNALOFGANSUAGRICULTURALUNIVERSITY双月刊三个HTA基因植物表达载体的构建及其转化鉴定+张嘉航，魏小红，高彩霞(1I甘肃农业大学生命科学技术学院，甘肃兰州730070；2．中国科学院遗传与发育生物学研究所，植物细胞与染色体工程重点实验室，北京100101)摘要：通过PCR扩增，将二穗短柄草基因Bradilg25390(BdHTA11)、Bradilg25400(BdHTA12)与拟南芥基因Atlg54640(AtHTA14)连接到植物表达载体pBINPLUS的多克隆位点，分别构成3个重组载体pBIN

2、PLUS-BdHTA11、pBINPLUS-BdHTA12和pBINPLUS-AtHTA14，载体pBINPLUS由烟草花叶病毒35s启动子启动目的基因的表达．采用农杆菌侵染拟南芥花序的转化方法，将这3个基因转化到拟南芥rat5突变体中，经过筛选获取转基因植株．经半定量RT-PCR分析，初步确定目的基因已经整合到拟南芥rat5突变体基因组中并过量表达．关键词：二穗短柄草；HTA基因；载体构建；rat5中图分类号：Q78文献标志码：A文章编号：1003—4315(2014)03—0053—07—、●●1·●1·1’onstltutfOnoirecOmbinantexPresslOnPlas

3、midsandidentificati0noftransformationofthreeHTAplantgenesZHANGJia-hang，WEIXiao—hong，GAOCai—xia。(1．CollegeofLifeScienceandTechnology，GansuAgriculturalUniversity，Lanzhou730070，China；2．StateKeyLaboratoryofPlantCellandChromosomeEngineering，InstituteofGeneticsandDevelopmentalBiology，ChineseAcademyofSc

4、iences，Beijing100101，China)Abstract：ThegenesofBrachypodiumdistachyonBdlg25390(BdHTA11)，Bdlg25400(BdHTA12)andarabidopsisgeneAtlg54640(AtHTA14)connectedtothemultiplecloningsiteofPBINPLUSbyPCR．Thisconstitutedthreerecombinantvectors-pBINPLUS-BdHTA11，pBINPLUS-BdHTA12andpBINPLUS-AtHTA14．AndthispBINPLUS

5、wasexpressedbythetobaccomosaicvirus35spromotertodrivetargetgenes．ThethreegenesweretransformedintoArabidopsisrat5mutantbythetechnologyofagrobacteriuminfectingArabidopsisthalianainflorescence．Transgenicplantswerescreenedout，whichwasdeterminedpreliminarilythatthetargetgeneshadbeenintegratedintoArabi

6、dopsisrat5mutantgenomeandoverex—pressingbysemi—quantitativePCR．Keywords：brochypodiumdistachyon；H了、Agene；vectorconstruction；rat5二穗短柄草是研究小麦等基因庞大复杂农作物性状与小麦、大麦等早熟禾亚科植物高度相似，并且的理想模式植物，它的基因组序列和很多重要农艺与小麦一样具有二倍体、四倍体和六倍体等多倍体第一作者：张嘉航(1983一)，女，硕士研究生，研究方向为发育生物学．E-mail：jiahangz1983@163．com通信作者：高彩霞，女，研究员，博士，主要从

7、事禾谷类植物遗传转化方法以及重要功能基因的分子生物学研究．E—mail：cxgao@genetics．ac．CFI基金项目：国家自然科学基金项目(31O71479／C13O6)．收稿日期：2013—04—15；修回日期：2013—07—2754甘肃农业大学学报资源[．2010年2月，二穗短柄草二倍体自交系1材料与方法BD21测序结果的发布(TheinternationalBrachyp—odiuminitiative，2010)，使