duchenne型肌营养不良小鼠模型鉴定及干细胞移植后dystrophin的变化

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1、2014年12月中国实验动物学报December2014第22卷第6期ACTALABOＲATOＲIUMANIMALISSCIENTIASINICAVol22No．6殝檵檵檵檵殝檵檵殝研究报告檵檵檵檵殝Duchenne型肌营养不良小鼠模型鉴定及干细胞移植后dystrophin的变化11111113庞荣清，李自安，阮光萍，何洁，王强，王金祥，潘兴华，张成，1，42，5张永云，张小飞(1．成都军区昆明总医院云南省干细胞工程实验室，昆明650032;2．军事医学科学院实验动物中心，北京100071;3．中山大学附属第一医院神经内科，广州510080;4．云南农业大学农科专业基础实验教学示范中心，昆明6

2、50201;5．北京市兽药监察所，北京102600)【摘要】目的建立Duchenne型肌营养不良(DMD)模型dko小鼠的鉴定方法，评估干细胞移植后dystrophin的再生水平。方法采用SSP-PCＲ方法鉴定杂合子鼠交配产生的子代鼠的基因型。生化分析仪测定dko小鼠血浆肌酸激酶含量，HE染色观察肌肉组织学变化。扩增人脐带间充质干细胞并注射到dko小鼠后肢肌肉，2个月后免疫荧光染色法检测dystrophin的表达。结果杂合子鼠交配可以产生三个基因型的子代鼠，21.2%的子代鼠可以鉴定为dko小鼠的基因型(285bp)。dko小鼠显示了肌营养不良的症状，血浆肌酸激酶含量高达(16，988.52±

3、617.48)IU/L，典型的病理变化包括肌纤维大小不一，多见核中移细胞，结缔组织增生或炎性细胞浸润。将人脐带间充质干细胞注射到dko小鼠后肢肌肉，2个月后可检测到人dystrophin的表达。结论采用SSP-PCＲ可用于鉴定dko小鼠基因型，dko小鼠是研究干细胞治疗DMD的理想动物模型。【关键词】Duchenne型肌营养不良;动物模型;基因型鉴定;干细胞治疗;Dko小鼠【中图分类号】Q95-33【文献标识码】A【文章编号】1005-4847(2014)06-0081-04Doi:10.3969/j．issn．1005－4847.2014.06.014Identificationofthem

4、ethodofestablishmentofaDKOmousemodelofDuchennemusculardystrophyandregenerationofdystrophinexpressioninvivoafterstemcelltransplantation111111PANGＲong-qing，LIZi-an，ＲUANGuang-ping，HEJie，WANGQiang，WANGJin-xiang，131，42，5PANXing-hua，ZHANGCheng，ZHANGYong-yun，ZHANGXiao-fei(1．StemCellEngineeringLaboratoryofY

5、unnanProvince，KunmingGeneralHospitalofChengduMilitaryCommand，Kunming650032，China;2．LaboratoryAnimalCenter，MilitaryAcademyofMedicalSciences，Beijing100071;3．DepartmentofNeurology，theFirstAffiliatedHospital，SunYat-senUniversity，Guangzhou510080;4．ExperimentCenterofYunnanAgriculturalUniversity，Kunming，65

6、0201;5．BeijingInstituteofVeterinaryDrugControl，Beijing，102600)【Abstract】ObjectiveToestablishamethodofidentificationofDKOmousemodelofDuchennemusculardystro-phy，andtoassessthedystrophinregenerationafterstemcelltransplantation．MethodsHeterozygousmicewerematedandtheresultingoffspringwereusedtoidentifyth

7、eirgenotypebySSP-PCＲ．Theplasmacreatinekinaselevelwasmeasured［基金项目］云南省基金项目(2011HB050，2013DA004);成都军区基金项目(B12021，2012WJ003);“十二五”重大项目(2011ZXJ09201-031)。［作者简介］庞荣清(1971－)，男，副主任医师/副教授，硕士生导师，研究方向:干细胞与再生医学，E