ezrin和merlin基因在胰腺癌细胞中的表达及意义硕士论文

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1、东南大学硕士学位论文Ezrin和merlin基因在胰腺癌细胞中的表达及意义姓名：陶可涛申请学位级别：硕士专业：外科学（普外）指导教师：周家华20090527中文摘要Ezrin和merlin基因在胰腺癌细胞中的表达及意义摘要研究生：陶可涛导师：周家华副教授东南大学临床医学院目的：研究ezrin和merlin基因在胰腺癌细胞中的表达情况，并观察转染野生型的ezrin和merlin基因后，对胰腺癌细胞生物学行为的影响。方法：应用RT-PCR与Westernblot方法检测ezrin和merlin基因在人正常胰腺导管上皮细胞(胛DE

2、)及人胰腺癌细胞(CoL0357、SWl990、PANCl、CAPANl、CAPAN2、CFPACl和BXPC3)中的mRNA和蛋白表达水平；应用DNA测序的方法对在胰腺癌中表达的ezrin和merlin两种基因进行序列分析；利用脂质体将重组质粒(pcDNA3．1+IiA-ezrin和pcDNA3．1+llA-merlin)转染入人胰腺癌细胞株SWl990中，应用扫描电子显微镜、lm实验、流式细胞学技术、Transwell迁移实验和细胞一基质黏附实验来观察两组转染基因对细胞形态结构、生长增殖能力、细胞周期及凋亡、细胞迁移和黏

3、附能力的影响。结果：Ezrin和merlin基因在8株细胞中均有不同程度的表达，其表达水平与胰腺癌细胞的分化程度无关；通过对胰腺癌细胞中表达的ezrin和merlin基因CDS区测序发现，ezrin基因DNA序列与基因库序列完全一致，而merlin基因在第7外显子的第1074位点存在碱基G的插入，第8外显子的第1116和1142位点存在碱基T的缺失，编码氨基酸第211位至第233位序列发生改变，表明在胰腺癌细胞中表达的Ezrin是野生型蛋白，而Merlin是突变型蛋白，失去了抑癌作用。Westernblot显示转染后细胞过度

4、表达Ezrin蛋白对细胞内突变型Merlin蛋白表达情况无明显影响；经野生型merlin基因转染后细胞，野生型Merlin蛋白的表达对Ezrin蛋白的表达亦无明显影响。与对照组相比较，转染野生型ezrin基因的SWl990细胞形态结构无明显改变，而转染野生型merlin基因的SWl990细胞，贴壁细胞数量减少，细胞表面微绒毛及丝状伪足明显减少；转染野生型ezrin和merlir圬基因的SWl990细胞其生长速度缓慢(P

5、能力有明显下降(PO．05)。Ezrin和Merlin蛋白的过度表达对细胞的生长增殖能力、细胞周期、迁移能力以及细胞一基质黏附能力均有～定的影响。结论：入胰腺癌细胞中存在着野生型ezrin和突变型merlin基因的不同程度的表达；野生型ezrin基因与胰腺肿瘤细胞的生长增殖和黏附能力有着密切的关系，而与胰腺肿瘤细胞的迁移能力无明显关系；野生型merlin基因

6、的表达可抑制胰腺癌细胞的生长增殖、迁移以及细胞基质黏附。关键词：胰腺癌；Ezrin：Merlin；增殖；迁移Ⅱ英文摘要ExpressionandSignificanceofEzrin，MerlinGeneinthePancreaticAdenocarcinomaCellAbstractGraduate：TAOKctaoSupervisor：AssociateProf．ZHOUJiahuaSchoolofClinicalMedicalScience，SoutheastUniversityObjective：Toinvestig

7、atetheexpressionofezrinandmerlingeneinsomepancreaticMenocarcinomacells，andtofurtherstudytheinfluenceonthebiologicalbehaviorsofpancreaticMenocarcinomacellbythewide-typeezrinandmerlingenefromtransfection．Method：Expressionofezrinandmerlingeneinthehumanpancreasductusen

8、dothelialcellI-IPDEandpancreaticadenocarcinomaCOL0357，SWl990，PANCl，CAPANIICAPAN2，CFPAClandBXPC3cellswasdetectedusmgRT-PCRandWesternblotanalysis．T