兽医微生物学实验指导

《兽医微生物学实验指导》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在教育资源-天天文库。

1、兽医微生物学实验指导畜牧兽医教研组编龙岩学院二00六年十月编写说明本实验指导配合《兽医微生物学》使用，目的是训练学生掌握兽医微生物学最基本的实验操作技能，了解微生物学的基本知识，加深理解课堂讲授的兽医微生物学理论知识，同时，通过实验培养学生观察、思考、分析问题和解决问题的能力；实事求是，严肃认真的科学态度；为以后课程的学习和将来的工作以及科学研究打下坚实的基础。本实验指导是在参考有关院校的兽医微生物学实验教材的基础上，结合我们的实验室条件以及仪器设备状况，经过多方取舍编写而成，可供生物科学系师生参考。由于编者

2、水平有限，加上时间仓促、经验不足，在许多方面肯定有不少缺点与错误，希望各位读者批评指正。在编写过程中，得到龙岩学院生物系全体师生的大力支持，在此表示感谢。编者2006.10目录实验一微生物染色法1实验二培养基的配制和灭菌6实验三细菌的分离与培养8实验四双向免疫扩散试验11实验五凝集反应14实验六酶联免疫吸附试验（ELISA）16实验七细菌各论（1）18实验八细菌各论（2）20实验九病毒的鸡胚培养22实验十病毒的血凝及血凝抑制试验25实验一微生物染色法一、目的要求1、学习掌握单染色的操作技术和无菌操作技术。2、

3、了解革兰氏染色机理，并掌握其操作技术。3、学习掌握细菌芽孢染色方法。二、实验原理细菌的涂片和染色是微生物学实验中的一项基本技术。细菌的细胞小而透明，在普通的光学显微镜下不易识别，必须对它们进行染色。利用单一染料对细菌进行染色，使经染色后的菌体与背景形成明显的色差，从而能更清楚地观察到其形态和结构。此法操作简便，适用于菌体一般形状和细菌排列的观察。常用碱性染料进行简单染色，这是因为在中性、碱性或弱酸性溶液中，细菌细胞通常带负电荷，而碱性染料在电离时，其分子的染色部分带正电荷，因此碱性染料的染色部分很容易与细菌结

4、合使细菌着色。经染色后的细菌细胞与背景形成鲜明的对比，在显微镜下更易于识别。常用作简单染色的染料有美蓝、结晶紫、碱性复红等。当细菌分解糖类产酸使培养基pH下降时，细菌所带正电荷增加，此时可用伊红、酸性复红或刚果红等酸性染料染色。染色前必须固定细菌。其目的有二：一是杀死细菌并使菌体粘附于玻片上；二是增加其对染料的亲和力。常用的有加热和化学固定两种方法。固定时尽量维持细胞原有的形。革兰氏染色法是1884年由丹麦病理学家ChristainGram氏创立的，革兰氏染色法可将所有的细菌区分为革兰氏阳性菌（G+）和革兰氏

5、阴性菌（G-）两大类。革兰氏染色法是细菌学中最重要的鉴别染色法。-27-革兰氏染色法的基本步骤是：先用初染剂结晶紫进行初染，再用碘液媒染，然后用乙醇(或丙酮)脱色，最后用复染剂(如番红)复染。经此方法染色后，细胞保留初染剂蓝紫色的细菌为革兰氏阳性菌；如果细胞中初染剂被脱色剂洗脱而使细菌染上复染剂的颜色(红色)，该菌属于革兰氏阴性菌。革兰氏染色法所以能将细菌分为革兰氏阳性和革兰氏阴性，是由这两类细菌细胞壁的结构和组成不同决定的。实际上，当用结晶紫初染后，像简单染色法一样，所有细菌都被染成初染剂的蓝紫色。碘作为媒

6、染剂，它能与结晶紫结合成结晶紫一碘的复合物，从而增强了染料与细菌的结合力。当用脱色剂处理时，两类细菌的脱色效果是不同的。革兰氏阳性细菌的细胞壁主要由肽聚糖形成的网状结构组成，壁厚、类脂质含量低，用乙醇(或丙酮)脱色时细胞壁脱水、使肽聚糖层的网状结构孔径缩小，透性降低，从而使结晶紫-碘的复合物不易被洗脱而保留在细胞内，经脱色和复染后仍保留初染剂的蓝紫色。革兰氏阴性菌则不同，由于其细胞壁肽聚糖层较薄、类脂含量高，所以当脱色处理时，类脂质被乙醇(或丙酮)溶解，细胞壁透性增大，使结晶紫-碘的复合物比较容易被洗脱出来，

7、用复染剂复染后，细胞被染上复染剂的红色。三、实验器材1、菌种：苏云金杆菌、金黄色葡萄球菌、大肠杆菌斜面菌种。2、显微镜、载玻片、擦镜纸、酒精灯、接种环、吸水纸、盖玻片、试管、水浴锅。3、草酸铵结晶紫染色液、路哥氏碘液、95%乙醇、0.5%番红色液、蒸馏水、双料瓶（香柏油和二甲苯）、5%孔雀绿溶液。四、方法步骤（一）单染色步骤：1、涂片：用1%盐酸清洁玻片后，在玻片中央滴上一小滴蒸馏水，再用无菌操作的方法挑菌少许于玻片的水中，并充分混匀涂成薄膜。2、干燥：将涂片置火焰高处微热烘干或自然干燥。3、固定：涂面朝上，

8、通过微火2-3次。4、染色：待玻片泠却后加结晶紫1-2滴于涂片上，覆盖涂面染色1-2分钟。-27-5、水洗：倾去染色液，用水自玻片一端轻轻冲洗至流下的水变无色为止（注：勿冲去菌体）。6、干燥：自然干燥，或用吸水纸吸干。7、镜检：油镜观察并绘图。（二）革兰氏染色步骤1、涂片：取清洁玻片一块，在玻片两端1/4处下面用记号笔分别标明S和E（见图示），并滴一滴蒸馏水，分别将金黄色葡萄球菌和大肠杆菌涂布在相应