预防篇――兽医微生物学综合实验

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1、预防篇――兽医微生物学综合实验实验一病原性细菌常规检验技术病原性细菌常规检验是兽医必须掌握的一项基本功，这直接关系疫病的发现与控制，本实验主要通过增菌培养基、选择培养基或鉴别培养基从病料中分离可疑沙门氏菌，经镜检，纯培养后，将其纯培养物回归实验动物，结合其生理生化实验指标及血清学反应特性作出最终判断，鉴定到属。目的要求了解采样、分离培养的基本原则。熟悉沙门氏菌的形态及染色特性。熟悉培养基的制备原则和方法。掌握沙门氏菌的常规微生物学诊断方法。内容与安排阶段一沙门氏菌的形态、培养特性的观察，实验材料的增菌与分离培养。阶段二识

2、别菌落、作纯培养及三糖铁琼脂培养。阶段三进行动物实验与生化实验。阶段四血清学诊断。阶段一分离培养材料与仪器材料：不同种沙门氏菌致死动物的病料，氯化镁孔雀绿增菌液，四硫磺酸钠煌绿增菌液，亚硒酸盐胱氨酸增菌液，DHL平板，亚硫酸铋琼脂平板，常规染色用试剂及备品。仪器：光学显微镜，温箱，天平，电热炉，高压蒸汽灭菌器，电热干燥箱。实验方法准备器材及配制本阶段所需培养基。用病料中直接抹片，经革兰氏染色镜检观察可疑菌的形态。取少量病料在无菌环境下，经研磨接种于氯化镁孔雀绿增菌液或四硫磺酸钠煌绿增菌液，42℃培养18-24h，或接种亚

3、硒酸盐胱氨酸增菌液于37℃培养18-24h，同时将病料接种于亚硫酸铋琼脂平板和DHL平板，37℃培养18-24h。将增菌培养物接种于亚硫酸铋琼脂平板和DHL平板，37℃培养18-24h。（如病料直接分离培养成功，4可省略。）观察菌落形态及染色特性。结果要求观察沙门氏菌的形态、大小与排列方式，掌握其染色特性。掌握沙门氏菌在鉴别培养基中培养特性及菌落特征，注意与其它细菌的区别。注意事项所用用具和操作均需无菌。染色涂片不宜太厚。划线分离细菌不宜将琼脂划破。思考题不同种属沙门氏菌致病性有何区别？为何在分离培养前进行增菌？用病料涂

4、片、染色与培养物涂片、染色的区别，及注意事项？阶段二纯培养材料与仪器材料：获得沙门氏菌单个菌落的平板培养物，普通琼脂斜面培养基、三糖铁培养基。仪器：同阶段一实验方法将获得沙门氏菌单个菌落接种于普通琼脂斜面培养基，37℃培养24h。经革兰氏染色镜检培养物纯度。将获得纯培养物接种于三糖铁培养基，37℃培养24h。结果要求镜检培养物纯度，观察多个视野，确认无其他杂菌后进行后续实验。接种三糖铁培养基时，先斜面化线，后高层穿刺，注意观察培养后培养基的变化。注意事项所用用具和操作均需无菌。染色涂片不宜太厚。注意三糖铁培养基的制备、接

5、种及观察。思考题纯培养的目的及意义？何谓三糖铁培养基，用其如何区分肠杆菌科的不同成员？阶段三动物实验及生化实验材料与仪器材料：沙门氏菌的纯培养物、灭菌生理盐水、小白鼠、鸡等无沙门氏菌实验动物、鉴别沙门氏菌所用生化培养基、各种常用生化试剂（醋酸铅试纸条、MR试剂、VP试剂、吲哚试剂等）。仪器：温箱、注射器等实验方法将确定为无杂菌的沙门氏菌纯培养物，用生理盐水经适当稀释后，分别采用腹腔注射和肌肉注射小白鼠和鸡，与健康动物隔离饲养，随时观察变化。同时将沙门氏菌纯培养物接种普通肉汤培养基（H2S生成实验）、葡萄糖蛋白胨水2支（V

6、P、MR实验）、蛋白胨水（吲哚实验）五种糖发酵管（葡萄糖、乳糖、麦芽糖、甘露醇、蔗糖）、柠檬酸盐琼脂（硝酸盐利用实验），37℃培养2-3天。滴加相应的生化试剂，观察生化实验结果。结果要求随时观察接种实验动物的变化，观察出现的临床症状，剖检后观察病变部位，判断是否符合沙门氏菌的致病特征，取样染色镜检。观察生化培养基的变化，记录结果，判断是否符合沙门氏菌的生化特性。注意事项注意实验动物的保定与隔离饲养。生化实验中糖发酵管均为穿刺接种。思考题常用实验动物有哪些，分别如何保定、接种？区别大肠杆菌和沙门氏菌常做的生化实验包括哪几种

7、？阶段四血清学实验材料与仪器材料：沙门氏菌的纯培养物，玻片，沙门氏菌的多价O血清（A-F群），O因子血清，H因子血清，接种环或牙签。实验方法通过玻片凝集实验利用沙门氏菌的多价O血清，初步诊断可疑菌是否为沙门氏菌。利用O因子血清判断其O抗原组成。利用H因子血清判断其H抗原组成。根据被检菌的O、H抗原对照抗原表，即可确定被检菌为哪种沙门氏菌。每做一个凝集实验，以生理盐水代替血清做对照。结果要求与空白对照比较判定凝集情况。做最后判定时结合各阶段实验结果给予定论注意事项各实验的内在联系。在实践中根据具体情况决定采用哪几项实验进行

8、检验。思考题沙门氏菌有几种抗原，根据抗原如何分群？将沙门氏菌鉴定到型需做那些检验项目？附：沙门氏菌鉴定程序采集病料革兰氏染色、镜检增菌鉴别培养革兰氏染色、镜检接种三糖铁培养基等纯培养观察培养特性、革兰氏染色、镜检动物实验生化实验血清学实验报告实验二病原快速检测技术随着分子生物学的迅猛发展，基因工程技术逐渐渗透到兽医诊