微生物学实验指导

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1、微生物学实验技术教学大纲课程编号：课程中英文名称：微生物学实验技术授课教师及职称：李增波开课院系、教研室/研究室：授课对象：课程类别：选修课学时：20学分：2.0预修课程/相关知识要求：微生物学授课目的及内容简介：微生物学实验课是与微生物学理论课同学期开设的一门重要的技术基础课。通过本课程的教学，使学生较熟练的掌握微生物学实验的基本操作技术和初步掌握研究微生物的基本方法。通过对具体微生物材料的观察、分析，进一步加深和巩固对微生物学理论课所学知识的理解并提高学生分析和解决实际问题的能力。本课程的基本内容：1

2、.掌握显微镜的构造、使用技术及保养方法；2.掌握干热灭菌箱、高压蒸汽灭菌锅、恒温培养箱的使用；3.掌握基本染色原理和方法以及制片技术；4.掌握细菌、酵母菌、霉菌的基本形态结构、生理生化特征和血清学特性，具有菌种初步鉴定的基本技能；5.掌握无菌操作方法，熟悉微生物分离、筛选和育种的基本知识和技能；6.熟悉菌种保藏的一般方法。教材及主要参考书目及文献：1.杜连祥，路福平主编。《微生物学实验技术》，中国轻工业出版社，2005，8.2.杜连祥等主编。《工业微生物实验技术》，天津市科学技术出版社，1992，10.主

3、要内容与安排：实验一学习显微镜的结构及使用实验二培养基的制备与灭菌实验三细菌的简单染色和革兰氏染色实验四细菌的荚膜染色实验五放线菌和真菌形态观察实验六微生物细胞大小测定和微生物显微镜直接计数法实验七土壤中微生物的稀释分离、纯化及无菌操作技术实验八生素效价的生物测定微生物综合实验柠檬酸发酵及提取39实验一学显微镜的结构及使用一、实验目的：人的眼睛只能识别大小为0.1㎜的物体。显微镜是精密的放大仪器，是生物学研究不可缺少的工具。我们用它可以观察肉眼看不见的微小生物的结构。中学最常用的是光学显微镜，为了正确操作

4、、妥善保管和维护显微镜，使之延长使用年限，我们必须首先了解显微镜的结构和功能。1、了解普通光学显微镜的基本构造，能够规范和较熟练地使用。2、了解几种特殊光学显微镜的构造、工作原理和用途。二显微镜的结构：一台显微镜包括机械装置和光学系统两大部分，注意比较和识别。1.机械部分（1）镜筒为显微镜上部圆形中空的长筒，筒口上端安装目镜，下端与物镜转换器相连。作用是保护成像的光路与亮度。（2）转换器固着在镜筒下端，分两层，上层固着不动，下层可自由转动。转换器上有2～4个圆孔，用来安装不同倍数的低倍或高倍物镜。（3）粗

5、准焦螺旋位于镜臂的上方，可以转动，以使镜筒能上下移动，从而调节焦距。39（4）细准焦螺旋位于镜臂的下方，它的移动范围较粗准焦螺旋小，可以细调焦距。（5）镜座是位于镜臂的下方，显微镜的底部，呈马蹄形的金属座。用以稳固和支持镜身。（6）镜柱从镜座向上直立的短柱。上连镜臂，下连镜座，可以支持镜臂和载物台。）（7)倾斜关节镜柱和镜臂交界处有一个能活动的关节。它可以使显微镜在一定的范围内后倾（一般倾斜不得超过45°）便于观察。但是在使用临时封片观察时，禁止使用倾斜关节，尤其是装片内含酸性试剂时严禁使用，以免污损镜体

6、。（8)载物台从镜臂向前方伸出的金属平台。呈方形或圆形，是放置玻片标本的地方。其中央具有通光孔，在通光孔的左右有一个弹性的金属压片夹，用来压住载玻片。较高级的显微镜，在载物台上常具有推进器，它包括夹片夹和推进螺旋，除夹住切片外，还可使切片在载物台上移动。2.光学部分（1)目镜它是安装在镜筒上端的镜头。是由一组透镜组成的，它可以使物镜成倍地分辨、放大物像，例如5×、10×、15×、20×。（2)物镜是决定显微镜质量的关键部件。安装在转换器的孔上，也是由一组透镜组成的，能够把物体清晰地放大。一般有三个放大倍数

7、不同的物镜，即：低倍物镜（8×或10×）、高倍物镜（40×或45×）和油浸物镜（90×或100×），根据需要可选择一个使用。显微镜的放大倍数是目镜倍数乘以物镜的倍数。（3)反光镜在聚光器的下面有一个一面平另一面凹的双面圆镜。可作各种方向的翻转，光线较强时使用平面镜，反之使用凹面镜。（4)聚光器（学生用显微镜一般没有这个装置）是由凹透镜组成的，它可以集中反光镜投射来的光线。在镜柱前面有一个聚光器调节螺旋，它可以使聚光器升降，用以调节光线的强弱，下降时明亮度降低，上升时明亮度加强。（5)虹彩光圈又称可变光阑，

8、由多数金属片组成（学生用显微镜一般没有这个装置），在较高级的显微镜上具有此装置。使用时移动其把柄，可控制聚光器透镜的通光范围，用以调节光的强度。虹彩光圈下常附有金属圈，其上装有滤光片，可调节光源的色调。39（6)遮光器简单的显微镜无聚光器和虹彩光圈，而装有遮光器。遮光器呈圆盘状，上面有大小不等的圆孔（光圈）。光圈对准通光孔，可以调节光线的强弱。3.显微镜的成像原理（放大原理）光线→反光镜→遮光器→通光孔→标本（一定要透明）→物