POU2F1调控miR-4...癌细胞增殖、迁移的实验研究_赵轶峰

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临床误诊误治２０23年2月第36卷第2期ＣｌｉｎｉｃａｌＭｉｓｄｉａｇｎｏｓｉｓ＆Ｍｉｓｔｈｅｒａｐｙ,Ｖｏｌ．36,Ｎｏ．2Februgary２０23·５１·ＰＯＵ２Ｆ１调控ｍｉＲ⁃４３３⁃３ｐ抑制胃癌细胞增殖、迁移的实验研究赵轶峰，李明霞，张超，胡小敏，王雄，赵铁军［摘要］目的探讨第２类ＰＯＵ结构域转录因子１（ＰＯＵ２Ｆ１）调控ｍｉＲ⁃４３３⁃３ｐ对胃癌细胞增殖、迁移能力的影响。方法选取２０２１年６月—２０２２年４月在河北北方学院附属第一医院收集的４５例胃癌组织、癌旁组织和人胃黏膜上皮细胞ＧＥＳ⁃１及人胃癌细胞株ＢＧＣ⁃８２３、ＭＫＮ⁃２８、ＳＧＣ⁃７９０１为研究对象，采用ｑＲＴ⁃ＰＣＲ检测胃癌组织、癌旁组织和ＧＥＳ⁃１、ＢＧＣ⁃８２３、ＭＫＮ⁃２８、ＳＧＣ⁃７９０１细胞中ｍｉＲ⁃４３３⁃３ｐ、ＰＯＵ２Ｆ１ｍＲＮＡ表达；采用蛋白印迹法检测胃癌组织、癌旁组织和ＧＥＳ⁃１、ＢＧＣ⁃８２３、ＭＫＮ⁃２８、ＳＧＣ⁃７９０１细胞中ＰＯＵ２Ｆ１蛋白表达；对ＢＧＣ⁃８２３细胞进行转染，分为空白组（细胞未转染）、ＰＯＵ２Ｆ１小干扰ＲＮＡ（ｓｉＲＮＡ）组（ＰＯＵ２Ｆ１ｓｉＲＮＡ转染细胞）、ＰＯＵ２Ｆ１ｓｉＲＮＡ⁃ＮＣ组（ＰＯＵ２Ｆ１ｓｉＲＮＡ阴性对照转染细胞）、ｍｉＲ⁃４３３⁃３ｐｓｉＲＮＡ组（ｍｉＲ⁃４３３⁃３ｐｓｉＲＮＡ转染细胞）、ｍｉＲ⁃４３３⁃３ｐｓｉＲＮＡ⁃ＮＣ组（ｍｉＲ⁃４３３⁃３ｐｓｉＲＮＡ阴性对照转染细胞）、ｍｉＲ⁃４３３⁃３ｐｓｉＲＮＡ＋ＰＯＵ２Ｆ１ｓｉＲＮＡ⁃ＮＣ组（ｍｉＲ⁃４３３⁃３ｐｓｉＲＮＡ和ＰＯＵ２Ｆ１ｓｉＲＮＡ阴性对照共转染细胞）、ｍｉＲ⁃４３３⁃３ｐｓｉＲＮＡ＋ＰＯＵ２Ｆ１ｓｉＲＮＡ组（ｍｉＲ⁃４３３⁃３ｐｓｉＲＮＡ和ＰＯＵ２Ｆ１ｓｉＲＮＡ共转染细胞），采用ＭＴＴ法和Ｔｒａｎ⁃ｓｗｅｌｌ实验分别检测ＢＧＣ⁃８２３细胞增殖、迁移能力；采用ｑＲＴ⁃ＰＣＲ和蛋白印迹法分别检测ＢＧＣ⁃８２３细胞中ｍｉＲ⁃４３３⁃３ｐ、ＰＯＵ２Ｆ１ｍＲＮＡ和ＰＯＵ２Ｆ１蛋白表达；采用双荧光素酶报告基因实验验证ＰＯＵ２Ｆ１与ｍｉＲ⁃４３３⁃３ｐ启动子区结合情况。结果与癌旁组织比较，胃癌组织ｍｉＲ⁃４３３⁃３ｐ表达水平显著降低，ＰＯＵ２Ｆ１ｍＲＮＡ和蛋白表达水平显著升高（Ｐ＜０．０５）；与ＧＥＳ⁃１细胞比较，ＢＧＣ⁃８２３、ＭＫＮ⁃２８、ＳＧＣ⁃７９０１细胞ｍｉＲ⁃４３３⁃３ｐ表达水平均降低，ＰＯＵ２Ｆ１ｍＲＮＡ和蛋白表达水平均升高（Ｐ＜０．０５），其中ＢＧＣ⁃８２３细胞ｍｉＲ⁃４３３⁃３ｐ表达水平最低，ＰＯＵ２Ｆ１ｍＲＮＡ和蛋白表达水平最高。沉默ＰＯＵ２Ｆ１可抑制ＢＧＣ⁃８２３细胞增殖、迁移，促进ｍｉＲ⁃４３３⁃３ｐ表达；沉默ｍｉＲ⁃４３３⁃３ｐ可促进ＢＧＣ⁃８２３细胞增殖、迁移；沉默ＰＯＵ２Ｆ１可抑制ｍｉＲ⁃４３３⁃３ｐ下调对ＢＧＣ⁃８２３细胞增殖、迁移的作用效果，并可促进ｍｉＲ⁃４３３⁃３ｐ表达。双荧光素酶报告基因实验证实ＰＯＵ２Ｆ１通过与ｍｉＲ⁃４３３⁃３ｐ启动子区结合，发挥调控ｍｉＲ⁃４３３⁃３ｐ表达的作用；沉默ＰＯＵ２Ｆ１可抑制ＢＧＣ⁃８２３细胞的增殖与迁移能力，逆转下调ｍｉＲ⁃４３３⁃３ｐ表达对ＢＧＣ⁃８２３细胞增殖、迁移的影响。结论ＰＯＵ２Ｆ１可与ｍｉＲ⁃４３３⁃３ｐ启动子区结合，沉默ＰＯＵ２Ｆ１可促进ｍｉＲ⁃４３３⁃３ｐ表达进而抑制胃癌细胞的增殖与迁移。［关键词］胃肿瘤；ＰＯＵ２Ｆ１；ｍｉＲ⁃４３３⁃３ｐ；细胞增殖；细胞运动［中国图书资料分类号］Ｒ７３５．２［文献标志码］Ａ［文章编号］１００２⁃３４２９（２０２３）０２⁃００５１⁃０６［ＤＯＩ］１０．３９６９／ｊ．ｉｓｓｎ．１００２⁃３４２９．２０２３．０２．０１２ＥｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌＳｔｕｄｙｏｆＰＯＵ２Ｆ１ＲｅｇｕｌａｔｉｎｇｍｉＲ⁃４３３⁃３ｐｔｏＩｎｈｉｂｉｔｔｈｅＰｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎａｎｄＭｉｇｒａｔｉｏｎｏｆＧａｓｔｒｉｃＣａｎｃｅｒＣｅｌｌｓＺＨＡＯＹｉ⁃ｆｅｎｇ，ＬＩＭｉｎｇ⁃ｘｉａ，ＺＨＡＮＧＣｈａｏ，ＨＵＸｉａｏ⁃ｍｉｎ，ＷＡＮＧＸｉｏｎｇ，ＺＨＡＯＴｉｅ⁃ｊｕｎ（ＤｅｐａｒｔｍｅｎｔｏｆＧａｓｔｒｏｉｎｔｅｓｔｉｎａｌＴｕｍｏｒＳｕｒｇｅｒｙ，ｔｈｅＦｉｒｓｔＨｏｓｐｉｔａｌＡｆｆｉｌｉａｔｅｄｔｏＨｅｂｅｉＮｏｒｔｈＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｚｈａｎｇｊｉａｋｏｕ，Ｈｅｂｅｉ０７５０００，Ｃｈｉｎａ）［Ａｂｓｔｒａｃｔ］ＯｂｊｅｃｔｉｖｅＴｏｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｅｔｈｅｅｆｆｅｃｔｓｏｆＲｅｃｏｍｂｉｎａｎｔＨｕｍａｎＰＯＵｄｏｍａｉｎ，ｃｌａｓｓ２，ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎｆａｃｔｏｒ１（ＰＯＵ２Ｆ１）ｏｎｔｈｅｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎａｎｄｍｉｇｒａｔｉｏｎｏｆｇａｓｔｒｉｃｃａｎｃｅｒｃｅｌｌｓｂｙｒｅｇｕｌａｔｉｎｇｍｉＲ⁃４３３⁃３ｐ．ＭｅｔｈｏｄｓＩｎｔｏｔａｌ，４５ｇａｓｔｒｉｃｃａｎｃｅｒｔｉｓｓｕｅｓ，ａｄｊａｃｅｎｔｔｉｓｓｕｅｓ，ｈｕｍａｎｇａｓｔｒｉｃｍｕｃｏｓａｌｅｐｉｔｈｅｌｉａｌｃｅｌｌｓＧＥＳ⁃１ａｎｄｈｕｍａｎｇａｓｔｒｉｃｃａｎｃｅｒｃｅｌｌｌｉｎｅｓＢＧＣ⁃８２３，ＭＫ⁃２８ａｎｄＢＧＣ⁃７９０１ｗｅｒｅｃｏｌｌｅｃｔｅｄｉｎｔｈｅＦｉｒｓｔＡｆｆｉｌｉａｔｅｄＨｏｓｐｉｔａｌｏｆＨｅｂｅｉＮｏｒｔｈＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙｆｒｏｍＪｕｎｅ２０２１ｔｏＡｐｒｉｌ２０２２．ｍＲＮＡｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｓｏｆｍｉＲ⁃４３３⁃３ｐａｎｄＰＯＵ２Ｆ１ｉｎｇａｓｔｒｉｃｃａｎｃｅｒｔｉｓｓｕｅｓ，ａｄｊａｃｅｎｔｔｉｓｓｕｅｓａｎｄＧＥＳ⁃１，ＢＧＣ⁃８２３，ＭＮ⁃２８，ＳＧＣ⁃７９０１ｃｅｌｌｓｗｅｒｅｄｅｔｅｃｔｅｄｂｙｑＲＴ⁃ＰＣＲ．ＴｈｅｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｏｆＰＯＵ２Ｆ１ｐｒｏｔｅｉｎｉｎｇａｓｔｒｉｃｃａｎｃｅｒｔｉｓｓｕｅｓ，ａｄｊａｃｅｎｔｔｉｓｓｕｅｓａｎｄＧＥＳ⁃１，ＢＧＣ⁃８２３，ＭＮ⁃２８，ＳＧＣ⁃７９０１ｃｅｌｌｓｗａｓｄｅｔｅｃｔｅｄｂｙｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ．ＢＧＣ⁃８２３ｃｅｌｌｓｗｅｒｅｔｒａｎｓｆｅｃｔｅｄ，ａｎｄｄｉｖｉｄｅｄｉｎｔｏｂｌａｎｋｇｒｏｕｐ（ｕｎｔｒａｎｓｆｅｃｔｅｄｃｅｌｌｓ），ＰＯＵ２Ｆ１ｓｍａｌｌｉｎｔｅｒｆｅｒｉｎｇＲＮＡ（ｓｉＲＮＡ）ｇｒｏｕｐ（ＰＯＵ２Ｆ１ｓｉＲＮＡｔｒａｎｓｆｅｃｔｅｄｃｅｌｌｓ），ＰＯＵ２Ｆ１ｓｉＲＮＡ⁃ＮＣｇｒｏｕｐ（ＰＯＵ２Ｆ１ｓｉＲＮＡｎｅｇａｔｉｖｅｃｏｎｔｒｏｌｔｒａｎｓｆｅｃｔｅｄｃｅｌｌｓ），ａｎｄｍｉＲ⁃４３３⁃３ｐｓｉＲＮＡｇｒｏｕｐ（ｍｉＲ⁃４３３⁃３ｐｓｉＲＮＡｔｒａｎｓｆｅｃｔｅｄｃｅｌｌｓ），ｍｉＲ⁃４３３⁃３ｐｓｉＲＮＡ⁃ＮＣｇｒｏｕｐ（ｍｉＲ⁃４３３⁃３ｐｓｉＲＮＡｎｅｇａｔｉｖｅｃｏｎｔｒｏｌｔｒａｎｓｆｅｃｔｅｄｃｅｌｌｓ），ｍｉＲ⁃４３３⁃３ｐｓｉＲＮＡ＋ＰＯＵ２Ｆ１ｓｉＲＮＡ⁃ＮＣｇｒｏｕｐ（ｍｉＲ⁃４３３⁃３ｐｓｉＲＮＡａｎｄＰＯＵ２Ｆ１ｓｉＲＮＡｎｅｇａｔｉｖｅｃｏｎｔｒｏｌｃｏ⁃ｔｒａｎｓｆｅｃｔｅｄｃｅｌｌｓ），ａｎｄｍｉＲ⁃基金项目：河北省医学科学研究课题计划项目（２０２１０９５１）作者单位：０７５０００河北张家口，河北北方学院附属第一医院胃肠肿瘤外科作者简介：赵轶峰，本科，副主任医师。主要从事胃肠肿瘤外科方向研究

1·５２·临床误诊误治２０23年2月第36卷第2期ＣｌｉｎｉｃａｌＭｉｓｄｉａｇｎｏｓｉｓ＆Ｍｉｓｔｈｅｒａｐｙ,Ｖｏｌ．36,Ｎｏ．2Februgary２０23４３３⁃３ｐｓｉＲＮＡ＋ＰＯＵ２Ｆ１ｓｉＲＮＡｇｒｏｕｐ（ｍｉＲ⁃４３３⁃３ｐｓｉＲＮＡａｎｄＰＯＵ２Ｆ１ｓｉＲＮＡｃｏ⁃ｔｒａｎｓｆｅｃｔｅｄｃｅｌｌｓ）．ＴｈｅｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎａｎｄｍｉｇｒａｔｉｏｎｏｆＢＧＣ⁃８２３ｃｅｌｌｓｗｅｒｅｄｅｔｅｃｔｅｄｂｙＭＴＴａｓｓａｙａｎｄＴｒａｎｓｗｅｌｌａｓｓａｙｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ．ＴｈｅｍＲＮＡａｎｄｐｒｏｔｅｉｎｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｓｏｆｍｉＲ⁃４３３⁃３ｐａｎｄＰＯＵ２Ｆ１ｉｎＢＧＣ⁃８２３ｃｅｌｌｓｗｅｒｅｄｅｔｅｃｔｅｄｂｙｑＲＴ⁃ＰＣＲａｎｄｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔｔｉｎｇ．ＤｕａｌｌｕｃｉｆｅｒａｓｅｒｅｐｏｒｔｅｒａｓｓａｙｗａｓｕｓｅｄｔｏｖｅｒｉｆｙｔｈｅｂｉｎｄｉｎｇｏｆＰＯＵ２Ｆ１ｔｏｔｈｅｍｉＲ⁃４３３⁃３ｐｐｒｏｍｏｔｅｒｒｅｇｉｏｎ．ＲｅｓｕｌｔｓＣｏｍｐａｒｅｄｗｉｔｈａｄｊａｃｅｎｔｔｉｓｓｕｅｓ，ｔｈｅｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｌｅｖｅｌｏｆｍｉＲ⁃４３３⁃３ｐｉｎｇａｓｔｒｉｃｃａｎｃｅｒｔｉｓｓｕｅｓｗａｓｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙｄｅｃｒｅａｓｅｄ，ｗｈｉｌｅＰＯＵ２Ｆ１ｍＲＮＡａｎｄｐｒｏｔｅｉｎｅｘｐｒｅｓ⁃ｓｉｏｎｌｅｖｅｌｓｗｅｒｅｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙｉｎｃｒｅａｓｅｄ（Ｐ＜０.０５）．ＣｏｍｐａｒｅｄｗｉｔｈＧＥＳ⁃１ｃｅｌｌｓ，ｔｈｅｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｌｅｖｅｌｏｆｍｉＲ⁃４３３⁃３ｐｉｎＢＧＣ⁃８２３，ＭＮ⁃２８ａｎｄＳＧＣ⁃７９０１ｃｅｌｌｓｗａｓｄｅｃｒｅａｓｅｄ，ｗｈｉｌｅｔｈｅｍＲＮＡａｎｄｐｒｏｔｅｉｎｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｌｅｖｅｌｓｏｆＰＯＵ２Ｆ１ｗｅｒｅｉｎ⁃ｃｒｅａｓｅｄ（Ｐ＜０.０５）．ＴｈｅｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｌｅｖｅｌｏｆｍｉＲ⁃４３３⁃３ｐｉｎＢＧＣ⁃８２３ｃｅｌｌｓｗａｓｔｈｅｌｏｗｅｓｔ，ａｎｄＰＯＵ２Ｆ１ｈａｄｔｈｅｈｉｇｈｅｓｔｍＲ⁃ＮＡａｎｄｐｒｏｔｅｉｎｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｌｅｖｅｌｓ．ＰＯＵ２Ｆ１ｓｉｌｅｎｃｉｎｇｉｎｈｉｂｉｔｅｄＢＧＣ⁃８２３ｃｅｌｌｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎａｎｄｍｉｇｒａｔｉｏｎ，ａｎｄｐｒｏｍｏｔｅｄｔｈｅｅｘ⁃ｐｒｅｓｓｉｏｎｏｆｍｉＲ⁃４３３⁃３ｐ．ｍｉＲ⁃４３３⁃３ｐｓｉｌｅｎｃｉｎｇｃｏｕｌｄｐｒｏｍｏｔｅｔｈｅｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎａｎｄｍｉｇｒａｔｉｏｎｏｆＢＧＣ⁃８２３ｃｅｌｌｓ．ＰＯＵ２Ｆ１ｓｉｌｅｎ⁃ｃｉｎｇｉｎｈｉｂｉｔｅｄｔｈｅｅｆｆｅｃｔｏｆｄｏｗｎ⁃ｒｅｇｕｌａｔｉｏｎｏｆｍｉＲ⁃４３３⁃３ｐｏｎｔｈｅｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎａｎｄｍｉｇｒａｔｉｏｎｏｆＢＧＣ⁃８２３ｃｅｌｌｓ，ａｎｄｐｒｏｍｏｔｅｄｔｈｅｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｏｆｍｉＲ⁃４３３⁃３ｐ．ＤｏｕｂｌｅｌｕｃｉｆｅｒａｓｅｒｅｐｏｒｔｅｒｇｅｎｅａｓｓａｙｃｏｎｆｉｒｍｅｄｔｈａｔＰＯＵ２Ｆ１ｐｌａｙｅｄａｒｏｌｅｉｎｒｅｇｕｌａｔｉｎｇｔｈｅｅｘ⁃ｐｒｅｓｓｉｏｎｏｆｍｉＲ⁃４３３⁃３ｐｂｙｂｉｎｄｉｎｇｔｏｔｈｅｍｉＲ⁃４３３⁃３ｐｐｒｏｍｏｔｅｒｒｅｇｉｏｎ．ＰＯＵ２Ｆ１ｓｉｌｅｎｃｉｎｇｉｎｈｉｂｉｔｅｄｔｈｅｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎａｎｄｍｉ⁃ｇｒａｔｉｏｎｏｆＢＧＣ⁃８２３ｃｅｌｌｓａｎｄｒｅｖｅｒｓｅｄｔｈｅｅｆｆｅｃｔｏｆｄｏｗｎ⁃ｒｅｇｕｌａｔｉｎｇｔｈｅｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｏｆｍｉＲ⁃４３３⁃３ｐｏｎｔｈｅｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎａｎｄｍｉ⁃ｇｒａｔｉｏｎｏｆＢＧＣ⁃８２３ｃｅｌｌｓ．ＣｏｎｃｌｕｓｉｏｎＰＯＵ２Ｆ１ｂｉｎｄｓｔｏｔｈｅｐｒｏｍｏｔｅｒｒｅｇｉｏｎｏｆｍｉＲ⁃４３３⁃３ｐ，ａｎｄＰＯＵ２Ｆ１ｓｉｌｅｎｃｉｎｇｃａｎｐｒｏ⁃ｍｏｔｅｔｈｅｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｏｆｍｉＲ⁃４３３⁃３ｐ，ｔｈｅｒｅｂｙｉｎｈｉｂｉｔｉｎｇｔｈｅｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎａｎｄｍｉｇｒａｔｉｏｎｏｆｇａｓｔｒｉｃｃａｎｃｅｒｃｅｌｌｓ．［Ｋｅｙｗｏｒｄｓ］Ｓｔｏｍａｃｈｎｅｏｐｌａｓｍｓ；ＰＯＵ２Ｆ１；ｍｉＲ⁃４３３⁃３ｐ；Ｃｅｌｌｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ；Ｃｅｌｌｍｏｖｅｍｅｎｔ胃癌是世界范围内一种可致命的癌症，具有复年４月在河北北方学院附属第一医院共收集４５例［１］发率高、转移快的特点。尽管胃癌的诊断和治疗胃癌组织及与之匹配的癌旁组织（距癌组织４ｃｍ取得一定进展，但是临床预后依然很差，５年生存率处）。其中男２２例，女２３例；年龄（５７．２５±３．４５）［２］仅为２１．３５％。因此，深入了解胃癌进展的分子岁；Ⅰ～Ⅱ期２４例，Ⅲ～Ⅳ期２１例。将所有临床组机制可以为改善其预后提供有价值的生物学标志物织标本在液氮中速冻后保存于－８０℃冰箱中。所和潜在的治疗靶点。微小核糖核酸（ｍｉＲＮＡ）是一有临床组织标本的组织学诊断至少由２名病理专家类由１９～２５个核苷酸组成的单链非编码ＲＮＡ，能证实。胃癌患者在手术或活检前均未接受任何抗肿够参与细胞增殖、凋亡、迁移和分化等许多生物过瘤治疗。所有患者在本研究开始前签署本研究知情［３］程。最近研究表明，位于１４号染色体上的抑癌基同意书。人胃黏膜上皮细胞株ＧＥＳ⁃１和人胃癌细因ｍｉＲ⁃４３３⁃３ｐ通过靶向生长因子受体结合蛋白２胞株ＢＧＣ⁃８２３、ＭＫＮ⁃２８、ＳＧＣ⁃７９０１均购自上海信裕［４］抑制食管鳞状细胞癌的增殖和侵袭。然而，正如生物科技有限公司，批号分别为ＸＹ１９１６７、大多数文献报道，对于ｍｉＲ⁃４３３⁃３ｐ的研究仅局限于ＸＹ１９３２５、ＸＹ２６３３１、ＸＹ２３１１５。本研究获得医院医靶基因的鉴定及对细胞生物学功能的影响方面，而学伦理委员会批准。关于其自身转录调控机制的研究却很少。本研究通１.１.２主要试剂与仪器：ＰＯＵ２Ｆ１小干扰ＲＮＡ过生物信息学预测发现第２类ＰＯＵ结构域转录因（ｓｉＲＮＡ）、ＰＯＵ２Ｆ１ｓｉＲＮＡ阴性对照、ｍｉＲ⁃４３３⁃３ｐ子１（ＰＯＵ２Ｆ１）与ｍｉＲ⁃４３３⁃３ｐ启动子区存在结合位ｓｉＲＮＡ、ｍｉＲ⁃４３３⁃３ｐｓｉＲＮＡ阴性对照及ｍｉＲ⁃４３３⁃３ｐ、点，ＰＯＵ２Ｆ１作为ＰＯＵ同源域家族的一员，已有研究ＰＯＵ２Ｆ１、Ｕ６引物均由上海基屹生物科技有限公司显示其在肝癌组织中高表达，ＰＯＵ２Ｆ１过表达促进设计合成；ＲＰＭＩ⁃１６４０培养基（批号ＫＥ１９０２）、Ｔｒｉｚｏｌ了肝癌细胞增殖、集落形成、上皮间质转化、迁移和试剂（批号ＫＥ１３１２７）、ＲＩＰＡ裂解液（批号ＴＭ侵袭，而沉默ＰＯＵ２Ｆ１表达则抑制了这些恶性表ＫＥ０４３６１）、Ｌｉｐｏｆｅｃｔａｍｉｎｅ２０００转染试剂盒（批号［５］型。但ＰＯＵ２Ｆ１调控ｍｉＲ⁃４３３⁃３ｐ对胃癌细胞增ＫＥ９０１１７）、四甲基偶氮唑蓝（ＭＴＴ，批号ＫＥ２００３５）殖、迁移的影响鲜有报道。因此，本研究旨在探索均购自上海创凌生物科技有限公司；胎牛血清ＰＯＵ２Ｆ１对ｍｉＲ⁃４３３⁃３ｐ表达的调控作用及对胃癌细（ＦＢＳ，批号９０１７０）、羊抗鼠二抗（批号３３１７５）、化学胞增殖、迁移的影响，以期进一步阐明胃癌的发病发光试剂盒（批号４０２１９）均购自北京威瑞谷生物技机制。术有限公司；鼠源ＰＯＵ２Ｆ１（批号１０７６Ｒ）、ＧＡＰＤＨ单克隆抗体（批号１０１３Ｒ）、双荧光素酶报告基因检１材料与方法测试剂盒（批号４１５９Ｋ）均购自常州福生生物技术１.１材料有限公司；ＣＯ培养箱（型号Ｇａｌａｘｙ４８）、酶标仪（型２１.１.１胃癌组织样本及细胞：２０２１年６月—２０２２号Ｓｕｎｒｉｓｅ）、凝胶成像仪（型号ＣｈａｍｐＣｈｅｍｉ５８０）均

2临床误诊误治２０23年2月第36卷第2期ＣｌｉｎｉｃａｌＭｉｓｄｉａｇｎｏｓｉｓ＆Ｍｉｓｔｈｅｒａｐｙ,Ｖｏｌ．36,Ｎｏ．2Februgary２０23·５３·购自北京博劢行仪器有限公司；ｑＲＴ⁃ＰＣＲ仪（型号ｓｉＲＮＡ⁃ＮＣ组（ＰＯＵ２Ｆ１ｓｉＲＮＡ阴性对照转染细胞）、ＣＧ⁃０５）、Ｔｒａｎｓｗｅｌｌ小室（型号ＰＩＥＰ１２Ｒ４８）均购自北ｍｉＲ⁃４３３⁃３ｐｓｉＲＮＡ组（ｍｉＲ⁃４３３⁃３ｐｓｉＲＮＡ转染细京明阳科华科技有限责任公司。胞）、ｍｉＲ⁃４３３⁃３ｐｓｉＲＮＡ⁃ＮＣ组（ｍｉＲ⁃４３３⁃３ｐｓｉＲＮＡ１.２研究方法阴性对照转染细胞）、ｍｉＲ⁃４３３⁃３ｐｓｉＲＮＡ＋ＰＯＵ２Ｆ１１.２.１细胞培养：将人胃黏膜上皮细胞株ＧＥＳ⁃１及ｓｉＲＮＡ⁃ＮＣ组（ｍｉＲ⁃４３３⁃３ｐｓｉＲＮＡ和ＰＯＵ２Ｆ１ｓｉＲＮＡ人胃癌细胞株ＢＧＣ⁃８２３、ＭＫＮ⁃２８、ＳＧＣ⁃７９０１在阴性对照共转染细胞）、ｍｉＲ⁃４３３⁃３ｐｓｉＲＮＡ＋ＲＰＭＩ⁃１６４０培养基中培养，该培养基含有１０％ＦＢＳ、ＰＯＵ２Ｆ１ｓｉＲＮＡ组（ｍｉＲ⁃４３３⁃３ｐｓｉＲＮＡ和ＰＯＵ２Ｆ１链霉素１００Ｕ／ｍｌ和青霉素１００Ｕ／ｍｌ，置于含有５％ｓｉＲＮＡ共转染细胞）。每组设置６个复孔。ＣＯ的３７℃培养箱中。取对数生长期细胞用于后１.２.５ＭＴＴ法检测ＢＧＣ⁃８２３细胞增殖能力：将２续实验。“１.２．４”中转染后培养４８ｈ的各组ＢＧＣ⁃８２３细胞３１.２.２ｑＲＴ⁃ＰＣＲ检测胃癌组织、癌旁组织和以１×１０个／孔的密度接种在９６孔板上，向每孔中ＧＥＳ⁃１、ＢＧＣ⁃８２３、ＭＫＮ⁃２８、ＳＧＣ⁃７９０１细胞中ｍｉＲ⁃加入ＭＴＴ１０μｌ，于３７℃、５％ＣＯ条件下培养３ｈ，２４３３⁃３ｐ、ＰＯＵ２Ｆ１ｍＲＮＡ表达：将胃癌组织和癌旁组然后向每孔中加入二甲基亚砜１５０μｌ，使用酶标仪织匀浆，使用Ｔｒｉｚｏｌ试剂从胃癌组织、癌旁组织和测定４９０ｎｍ波长处的光密度（ＯＤ）值，计算ＧＥＳ⁃１、ＢＧＣ⁃８２３、ＭＫＮ⁃２８、ＳＧＣ⁃７９０１细胞中提取总ＢＧＣ⁃８２３细胞增殖率，增殖率＝各转染组ＯＤ值／空ＲＮＡ。使用ＮａｎｏＤｒｏｐ２０００分光光度计测定ＲＮＡ白组ＯＤ值×１００％。浓度后，将ＲＮＡ反转录为ｃＤＮＡ。在ＰＣＲ系统上使１.２.６Ｔｒａｎｓｗｅｌｌ实验检测ＢＧＣ⁃８２３细胞迁移能用ＴｒａｎｓＳｔａｒｔ®ＧｒｅｅｎｑＰＣＲＳｕｐｅｒＭｉｘ进行ＰＣＲ扩力：将“１．２．４”中转染后的各组ＢＧＣ⁃８２３细胞加入增。引物序列：ｍｉＲ⁃４３３⁃３ｐ上游引物：５′⁃ＡＧＡＡＧ⁃到无ＦＢＳ的ＲＰＭＩ⁃１６４０培养基重悬后，调整细胞浓５ＴＡＣＧＧＴＧＡＧＣＣＴＧＴＣ⁃３′，ｍｉＲ⁃４３３⁃３ｐ下游引物：５′⁃度为２×１０个／ｍｌ，取１００μｌ转移至Ｔｒａｎｓｗｅｌｌ上室ＧＣＴＣＴＣＡＣＴＣＴＧＴＣＡＣＣＣＡＧ⁃３′；ＰＯＵ２Ｆ１上游引物：中，并使用６００μｌ含有１０％ＦＢＳ的ＲＰＭＩ⁃１６４０培５′⁃ＡＴＣＴＧＧＡＣＴＡＣＧＣＴＡＧＣＴＧＡＣ⁃３′，ＰＯＵ２Ｆ１下游养基填充于Ｔｒａｎｓｗｅｌｌ下室中。４８ｈ后，细胞用４％引物：５′⁃ＣＧＴＡＧＴＣＣＧＡＴＣＡＡＧＣＴＡＧＣＡ⁃３′；Ｕ６上游多聚甲醛固定２０ｍｉｎ，０．１％结晶紫染色２０ｍｉｎ，显引物：５′⁃ＣＴＣＧＣＴＴＣＧＧＣＡＣＡＣＡ⁃３′，Ｕ６下游引物：微镜下随机选取６个视野计数迁移细胞数目。５′⁃ＴＧＧＴＧＴＣＧＴＧＧＡＧＴＣＧ⁃３′。以Ｕ６作为内参，通１.２.７ｑＲＴ⁃ＰＣＲ和蛋白印迹法检测ＢＧＣ⁃８２３细胞－ΔΔＣｔ过２法分析ｍｉＲ⁃４３３⁃３ｐ、ＰＯＵ２Ｆ１ｍＲＮＡ的相对中ｍｉＲ⁃４３３⁃３ｐ、ＰＯＵ２Ｆ１ｍＲＮＡ和蛋白表达：将表达。每种细胞设置６个重复组。“１.２．４”中转染后培养４８ｈ的各组ＢＧＣ⁃８２３细胞，１.２.３蛋白印迹法检测胃癌组织、癌旁组织和按照“１．２．２”和“１．２．３”中的方法检测ＢＧＣ⁃８２３细ＧＥＳ⁃１、ＢＧＣ⁃８２３、ＭＫＮ⁃２８、ＳＧＣ⁃７９０１细胞中胞中ｍｉＲ⁃４３３⁃３ｐ、ＰＯＵ２Ｆ１ｍＲＮＡ和蛋白表达。ＰＯＵ２Ｆ１蛋白表达：将胃癌组织和癌旁组织匀浆，利１.２.８双荧光素酶报告基因实验：使用ＴｒａｎｓｍｉＲ用ＲＩＰＡ裂解液提取胃癌组织、癌旁组织和ＧＥＳ⁃１、ｖ２．０ｄａｔａｂａｓｅ在线软件预测ＰＯＵ２Ｆ１与ｍｉＲ⁃４３３⁃３ｐＢＧＣ⁃８２３、ＭＫＮ⁃２８、ＳＧＣ⁃７９０１细胞中蛋白质，定量蛋启动子区的结合位点，分别构建ｍｉＲ⁃４３３⁃３ｐ启动子白浓度后，通过电泳分离等量蛋白质。电泳结束后，区野生型（ＷＴ）和突变型（ＭＵＴ）报告质粒，标记为将蛋白质转移至聚偏氟乙烯膜上，然后用５％脱脂ｍｉＲ⁃４３３⁃３ｐ⁃ＷＴ、ｍｉＲ⁃４３３⁃３ｐ⁃ＭＵＴ。按照Ｌｉｐｏ⁃ＴＭ牛奶封闭膜２ｈ，用ＴＢＳＴ洗膜３次，再将膜分别与ｆｅｃｔａｍｉｎｅ２０００转染试剂盒说明书将ｍｉＲ⁃４３３⁃３ｐ⁃鼠源ＰＯＵ２Ｆ１（１︰２０００）、ＧＡＰＤＨ（１︰３０００）一抗ＷＴ和ｍｉＲ⁃４３３⁃３ｐ⁃ＭＵＴ分别与ＰＯＵ２Ｆ１ｓｉＲＮＡ阴性在４℃下孵育过夜。第２日用ＴＢＳＴ洗膜３次后，将对照或ＰＯＵ２Ｆ１ｓｉＲＮＡ共转染于ＢＧＣ⁃８２３细胞，分膜与羊抗鼠二抗（１︰２０００）于室温下孵育３ｈ，化别记为：ＰＯＵ２Ｆ１ｓｉＲＮＡ⁃ＮＣ＋ｍｉＲ⁃４３３⁃３ｐ⁃ＷＴ组学发光试剂盒可视化蛋白，采用Ｉｍａｇｅ软件对灰度（ＰＯＵ２Ｆ１ｓｉＲＮＡ阴性对照和ｍｉＲ⁃４３３⁃３ｐ⁃ＷＴ共转值进行量化分析（内参为ＧＡＰＤＨ）。每种细胞设置染）、ＰＯＵ２Ｆ１ｓｉＲＮＡ＋ｍｉＲ⁃４３３⁃３ｐ⁃ＷＴ组（ＰＯＵ２Ｆ１６个重复组。ｓｉＲＮＡ和ｍｉＲ⁃４３３⁃３ｐ⁃ＷＴ共转染）、ＰＯＵ２Ｆ１ｓｉＲＮＡ⁃１.２.４ＢＧＣ⁃８２３细胞转染与分组：取对数生长期ＮＣ＋ｍｉＲ⁃４３３⁃３ｐ⁃ＭＵＴ组（ＰＯＵ２Ｆ１ｓｉＲＮＡ阴性对照ＴＭＢＧＣ⁃８２３细胞，利用Ｌｉｐｏｆｅｃｔａｍｉｎｅ２０００转染试剂和ｍｉＲ⁃４３３⁃３ｐ⁃ＭＵＴ共转染）、ＰＯＵ２Ｆ１ｓｉＲＮＡ＋ｍｉＲ⁃盒进行转染，分为空白组（细胞未转染）、ＰＯＵ２Ｆ１４３３⁃３ｐ⁃ＭＵＴ组（ＰＯＵ２Ｆ１ｓｉＲＮＡ和ｍｉＲ⁃４３３⁃３ｐ⁃ＭＵＴｓｉＲＮＡ组（ＰＯＵ２Ｆ１ｓｉＲＮＡ转染细胞）、ＰＯＵ２Ｆ１共转染）。每组设置６个复孔，转染４８ｈ后，使用双

3·５４·临床误诊误治２０23年2月第36卷第2期ＣｌｉｎｉｃａｌＭｉｓｄｉａｇｎｏｓｉｓ＆Ｍｉｓｔｈｅｒａｐｙ,Ｖｏｌ．36,Ｎｏ．2Februgary２０23荧光素酶报告基因分析系统评估荧光素酶相对ｍｉＲ⁃４３３⁃３ｐ、ＰＯＵ２Ｆ１ｍＲＮＡ和ＰＯＵ２Ｆ１蛋白表达的活性。影响与空白组和ＰＯＵ２Ｆ１ｓｉＲＮＡ⁃ＮＣ组比较，１.３统计学方法应用ＳＰＳＳ２５．０软件分析数据，ＰＯＵ２Ｆ１ｓｉＲＮＡ组ＢＧＣ⁃８２３细胞增殖率、迁移细胞计量资料以均数±标准差（ｘ±ｓ）表示，２组间比较数目、ＰＯＵ２Ｆ１ｍＲＮＡ和ＰＯＵ２Ｆ１蛋白表达水平显著采用ｔ检验，多组间比较采用单因素方差分析，进一降低，ｍｉＲ⁃４３３⁃３ｐ表达水平显著升高（Ｐ＜０．０５）；空步两两比较采用ＳＮＫ⁃ｑ检验。α＝０．０５为检验白组和ＰＯＵ２Ｆ１ｓｉＲＮＡ⁃ＮＣ组上述指标比较差异无水准。统计学意义（Ｐ＞０.０５）。见表３。２.４沉默ＰＯＵ２Ｆ１逆转下调ｍｉＲ⁃４３３⁃３ｐ表达对２结果ＢＧＣ⁃８２３细胞增殖、迁移及ｍｉＲ⁃４３３⁃３ｐ、ＰＯＵ２Ｆ１２.１胃癌组织、癌旁组织中ｍｉＲ⁃４３３⁃３ｐ及ＰＯＵ２Ｆ１ｍＲＮＡ和ＰＯＵ２Ｆ１蛋白表达的影响与空白组和ｍＲＮＡ、蛋白表达比较与癌旁组织比较，胃癌组织ｍｉＲ⁃４３３⁃３ｐｓｉＲＮＡ⁃ＮＣ组比较，ｍｉＲ⁃４３３⁃３ｐｓｉＲＮＡ组ｍｉＲ⁃４３３⁃３ｐ表达水平显著降低，ＰＯＵ２Ｆ１ｍＲＮＡ和和ｍｉＲ⁃４３３⁃３ｐｓｉＲＮＡ＋ＰＯＵ２Ｆ１ｓｉＲＮＡ⁃ＮＣ组蛋白表达水平显著升高（Ｐ＜０．０５），见表１。ＢＧＣ⁃８２３细胞增殖率、迁移细胞数目显著升高（Ｐ＜２.２ＧＥＳ⁃１、ＢＧＣ⁃８２３、ＭＫＮ⁃２８、ＳＧＣ⁃７９０１细胞中０.０５），ｍｉＲ⁃４３３⁃３ｐ表达水平显著降低（Ｐ＜０．０５），ｍｉＲ⁃４３３⁃３ｐ及ＰＯＵ２Ｆ１ｍＲＮＡ、蛋白表达比较与ＰＯＵ２Ｆ１ｍＲＮＡ和蛋白表达水平差异无统计学意义ＧＥＳ⁃１细胞比较，ＢＧＣ⁃８２３、ＭＫＮ⁃２８、ＳＧＣ⁃７９０１细胞（Ｐ＞０.０５）；与ｍｉＲ⁃４３３⁃３ｐｓｉＲＮＡ组和ｍｉＲ⁃４３３⁃３ｐｍｉＲ⁃４３３⁃３ｐ表达水平均降低，ＰＯＵ２Ｆ１ｍＲＮＡ和蛋ｓｉＲＮＡ＋ＰＯＵ２Ｆ１ｓｉＲＮＡ⁃ＮＣ组比较，ｍｉＲ⁃４３３⁃３ｐ白表达水平均升高（Ｐ＜０．０５），其中ＢＧＣ⁃８２３细胞ｓｉＲＮＡ＋ＰＯＵ２Ｆ１ｓｉＲＮＡ组ＢＧＣ⁃８２３细胞增殖率、迁ｍｉＲ⁃４３３⁃３ｐ表达水平最低，ＰＯＵ２Ｆ１ｍＲＮＡ和蛋白移细胞数目、ＰＯＵ２Ｆ１ｍＲＮＡ和ＰＯＵ２Ｆ１蛋白表达水表达水平最高。见表２。因此选用ＢＧＣ⁃８２３细胞为平显著降低，ｍｉＲ⁃４３３⁃３ｐ表达水平显著升高（Ｐ＜研究对象进行后续研究。０.０５）。见表４。２.３沉默ＰＯＵ２Ｆ１对ＢＧＣ⁃８２３细胞增殖、迁移及表１胃癌组织、癌旁组织中ｍｉＲ⁃４３３⁃３ｐ及ＰＯＵ２Ｆ１ｍＲＮＡ、蛋白表达比较（ｘ±ｓ）组织例数ｍｉＲ⁃４３３⁃３ｐＰＯＵ２Ｆ１ｍＲＮＡＰＯＵ２Ｆ１蛋白胃癌组织４５０．２９±０．０４①①①３．５２±０．４１０．９６±０．１４癌旁组织４５１．０２±０．０３１．０４±０．０２０．１８±０．０２①注：ＰＯＵ２Ｆ１为第２类ＰＯＵ结构域转录因子１；与癌旁组织比较，Ｐ＜０．０５表２ＧＥＳ⁃１、ＢＧＣ⁃８２３、ＭＫＮ⁃２８、ＳＧＣ⁃７９０１细胞中ｍｉＲ⁃４３３⁃３ｐ及ＰＯＵ２Ｆ１ｍＲＮＡ、蛋白表达比较（ｘ±ｓ）细胞例数ｍｉＲ⁃４３３⁃３ｐＰＯＵ２Ｆ１ｍＲＮＡＰＯＵ２Ｆ１蛋白ＧＥＳ⁃１细胞６１．０３±０．０１１．０５±０．０６０．１５±０．０２ＢＧＣ⁃８２３细胞６０．１９±０．０１①①①３．７６±０．４３１．０３±０．２１ＭＫＮ⁃２８细胞６０．２６±０．０２①①①３．３１±０．３９０．８７±０．１２ＳＧＣ⁃７９０１细胞６０．３１±０．０４①①①３．２４±０．３５０．８２±０．１５①注：ＰＯＵ２Ｆ１为第２类ＰＯＵ结构域转录因子１；与ＧＥＳ⁃１细胞比较，Ｐ＜０．０５表３沉默ＰＯＵ２Ｆ１对ＢＧＣ⁃８２３细胞增殖、迁移及ｍｉＲ⁃４３３⁃３ｐ、ＰＯＵ２Ｆ１ｍＲＮＡ和ＰＯＵ２Ｆ１蛋白表达的影响（ｘ±ｓ）细胞增迁移细胞组别例数ｍｉＲ⁃４３３⁃３ｐＰＯＵ２Ｆ１ｍＲＮＡＰＯＵ２Ｆ１蛋白殖率（％）数目（个）空白组６１００．００±０．００１２２．５６±１３．２５１．０５±０．０５１．００±０．０４１．０８±０．１１ＰＯＵ２Ｆ１ｓｉＲＮＡ⁃ＮＣ组６９９．７１±０．３４１２５．７４±１５．４１１．０３±０．０６０．９８±０．０７１．０２±０．１３ＰＯＵ２Ｆ１ｓｉＲＮＡ组６３１．７５±３．９２①②①②①②①②①②４６．３７±５．８７２．１９±０．２４０．３７±０．０５０．３４±０．０６①②注：ＰＯＵ２Ｆ１为第２类ＰＯＵ结构域转录因子１；与空白组比较，Ｐ＜０．０５；与ＰＯＵ２Ｆ１ｓｉＲＮＡ⁃ＮＣ组比较，Ｐ＜０．０５

4临床误诊误治２０23年2月第36卷第2期ＣｌｉｎｉｃａｌＭｉｓｄｉａｇｎｏｓｉｓ＆Ｍｉｓｔｈｅｒａｐｙ,Ｖｏｌ．36,Ｎｏ．2Februgary２０23·５５·表４沉默ＰＯＵ２Ｆ１逆转下调ｍｉＲ⁃４３３⁃３ｐ表达对ＢＧＣ⁃８２３细胞增殖、迁移及ｍｉＲ⁃４３３⁃３ｐ、ＰＯＵ２Ｆ１ｍＲＮＡ和ＰＯＵ２Ｆ１蛋白表达的影响（ｘ±ｓ）细胞增殖率迁移细胞数目组别例数ｍｉＲ⁃４３３⁃３ｐＰＯＵ２Ｆ１ｍＲＮＡＰＯＵ２Ｆ１蛋白（％）（个）空白组６１００．００±０．００１２２．５６±１３．２５１．０５±０．０５１．００±０．０４１．０８±０．１１ｍｉＲ⁃４３３⁃３ｐｓｉＲＮＡ⁃ＮＣ组６１０１．１４±１．２０１２１．５５±１５．３３１．０７±０．０６１．０２±０．０３１．０５±０．０９ｍｉＲ⁃４３３⁃３ｐｓｉＲＮＡ组６１５３．６８±１４．７３①②①②①②０．９９±０．０３１．０６±０．１２１８２．３５±１９．５６０．２９±０．０５阴性共转染组６１５１．９０±１３．９７①②①②①②１．０１±０．０５１．１０±０．１３１８５．３６±２０．７７０．２７±０．０４共转染组６１０９．５６±１４．５１③④③④③④③④③④１３９．５６±１７．４２０．５６±０．０７０．３９±０．０６０．３８±０．０７①②注：ＰＯＵ２Ｆ１为第２类ＰＯＵ结构域转录因子１；与空白组比较，Ｐ＜０．０５；与ｍｉＲ⁃４３３⁃３ｐｓｉＲＮＡ⁃ＮＣ组比较，Ｐ＜０．０５；与③④ｍｉＲ⁃４３３⁃３ｐｓｉＲＮＡ组比较，Ｐ＜０．０５；与阴性共转染组比较，Ｐ＜０．０５；阴性共转染组为ｍｉＲ⁃４３３⁃３ｐｓｉＲＮＡ和ＰＯＵ２Ｆ１ｓｉＲＮＡ阴性对照共转染，共转染组为ｍｉＲ⁃４３３⁃３ｐｓｉＲＮＡ和ＰＯＵ２Ｆ１ｓｉＲＮＡ共转染２.５生物信息学预测ｍｉＲ⁃４３３⁃３ｐ上游转录因子通过靶向环磷酸腺苷反应元件结合蛋白来抑制神经使用ＴｒａｎｓｍｉＲｖ２．０ｄａｔａｂａｓｅ预测发现ＰＯＵ２Ｆ１与胶质瘤细胞的生长、侵袭及迁移。本研究结果显示，ｍｉＲ⁃４３３⁃３ｐ启动子区存在结合位点，结合位点位于ｍｉＲ⁃４３３⁃３ｐ在胃癌组织和胃癌细胞ＢＧＣ⁃８２３、１４号染色体上的１００８８１２４７～１００８８１２６２区域，结ＭＫＮ⁃２８、ＳＧＣ⁃７９０１中呈低表达状态，且ｍｉＲ⁃４３３⁃３ｐ合序列为ＧＧＧＡＧＴＧＣＡＧＡＧＣＡＴ。双荧光素酶报告在ＢＧＣ⁃８２３细胞中的表达水平最低，因此本研究选基因实验结果表明，ＰＯＵ２Ｆ１ｓｉＲＮＡ⁃ＮＣ＋ｍｉＲ⁃４３３⁃择ＢＧＣ⁃８２３细胞进行转染实验。本研究还发现，抑３ｐ⁃ＷＴ组、ＰＯＵ２Ｆ１ｓｉＲＮＡ＋ｍｉＲ⁃４３３⁃３ｐ⁃ＷＴ组、制ｍｉＲ⁃４３３⁃３ｐ表达可明显促进ＢＧＣ⁃８２３细胞的增ＰＯＵ２Ｆ１ｓｉＲＮＡ⁃ＮＣ＋ｍｉＲ⁃４３３⁃３ｐ⁃ＭＵＴ组及ＰＯＵ２Ｆ１殖和迁移，提示ｍｉＲ⁃４３３⁃３ｐ在胃癌中发挥着抑癌基ｓｉＲＮＡ＋ｍｉＲ⁃４３３⁃３ｐ⁃ＭＵＴ组荧光素酶相对活性分别因的作用。但关于ｍｉＲ⁃４３３⁃３ｐ上游的调控机制尚为１．０９±０．１３、２．０６±０．１９、１．０６±０．１２、１．０４±不清楚，据报道转录因子可正向或负向调节ｍｉＲＮＡ［１７］０.１１，与ＰＯＵ２Ｆ１ｓｉＲＮＡ⁃ＮＣ＋ｍｉＲ⁃４３３⁃３ｐ⁃ＷＴ组比的表达，因此本研究通过使用ＴｒａｎｓｍｉＲｖ２.０ｄａ⁃较，ＰＯＵ２Ｆ１ｓｉＲＮＡ＋ｍｉＲ⁃４３３⁃３ｐ⁃ＷＴ组荧光素酶相ｔａｂａｓｅ预测发现转录因子ＰＯＵ２Ｆ１与ｍｉＲ⁃４３３⁃３ｐ启对活性显著升高（Ｐ＜０.０５）；ＰＯＵ２Ｆ１ｓｉＲＮＡ⁃ＮＣ＋动子区存在结合位点。ｍｉＲ⁃４３３⁃３ｐ⁃ＭＵＴ组和ＰＯＵ２Ｆ１ｓｉＲＮＡ＋ｍｉＲ⁃４３３⁃３ｐ⁃ＰＯＵ２Ｆ１也称为八聚体结合转录因子１，由染色ＭＵＴ组荧光素酶相对活性比较差异无统计学意义体１ｑ２４.１上的基因位点编码。它是一种普遍存在（Ｐ＞０.０５）。的转录因子，可调节与细胞周期相关靶基因的表［１８］达。相关文献报道，ＰＯＵ２Ｆ１通过脂肪非典型钙３讨论黏蛋白１信号通路促进肝细胞癌的生长和转移，可［１９］胃癌是癌症相关死亡的第三大原因，也是全球作为肝癌治疗的靶点。敲低ＰＯＵ２Ｆ１表达可导［６］第五大癌症。相关数据统计，东亚地区胃癌发病致头颈部鳞状细胞癌细胞的增殖和侵袭数目显著减［２０］率急剧升高，该地区男女发病率在全球范围内最少。ＰＯＵ２Ｆ１在肺癌细胞中高表达，且具有促进［７⁃８］高。由于缺乏特异性生物学标志物，大多数新肺癌细胞上皮间充质转化、迁移侵袭、增殖及克隆形［９⁃１０］［２１］诊断的胃癌患者在确诊时已处于晚期。因此，成等生物学功能。ＰＯＵ２Ｆ１在胃癌患者中上调并［２２］迫切需要进一步研究胃癌的发病机制并确定与胃癌且与较差的存活率显著相关。有研究报道相关的特异性标志物。ＰＯＵ２Ｆ１可与ｍｉＲ⁃４４９０的启动子序列互补结合调［２３］ｍｉＲＮＡ在肿瘤细胞增殖、分化、凋亡、迁移和侵节ｍｉＲ⁃４４９０在胃癌中的表达。但ＰＯＵ２Ｆ１与［１１⁃１２］［１３］袭中发挥重要作用。李燕等发现ｍｉＲ⁃４３３⁃ｍｉＲ⁃４３３⁃３ｐ在胃癌中的调控关系尚不十分清楚。３ｐ在宫颈癌细胞中低表达，ｍｉＲ⁃４３３⁃３ｐ过表达可抑本研究结果显示，ＰＯＵ２Ｆ１ｍＲＮＡ和蛋白在胃癌组［１４］制宫颈癌细胞的增殖、迁移及侵袭。万智双等表织和细胞中高表达，双荧光素酶报告基因实验证实明ｍｉＲ⁃４３３⁃３ｐ可通过下调丝裂原活化蛋白激酶８ＰＯＵ２Ｆ１作为转录因子，通过与ｍｉＲ⁃４３３⁃３ｐ启动子表达抑制肝癌细胞ＭＨＣＣ９７Ｈ的迁移和侵袭。杨艳区结合，发挥调控ｍｉＲ⁃４３３⁃３ｐ表达的作用；沉默［１５］等阐明下调ｍｉＲ⁃４３３⁃３ｐ可促进结直肠癌ＨＴ⁃２９ＰＯＵ２Ｆ１可抑制ＢＧＣ⁃８２３细胞的增殖与迁移能力，［１６］细胞增殖、迁移、侵袭。ＳＵＮ等报道ｍｉＲ⁃４３３⁃３ｐ促进ｍｉＲ⁃４３３⁃３ｐ表达，下调ｍｉＲ⁃４３３⁃３ｐ表达对

5·５６·临床误诊误治２０23年2月第36卷第2期ＣｌｉｎｉｃａｌＭｉｓｄｉａｇｎｏｓｉｓ＆Ｍｉｓｔｈｅｒａｐｙ,Ｖｏｌ．36,Ｎｏ．2Februgary２０23ＢＧＣ⁃８２３细胞增殖、迁移的影响。提示沉默ｔａｒｇｅｔｅｄｍｉｃｒｏｒｎａｐｒｏｆｉｌｉｎｇｉｎｇａｓｔｒｉｃｃａｎｃｅｒｗｉｔｈｃｌｉｎｉｃａｌＰＯＵ２Ｆ１后，低表达的ＰＯＵ２Ｆ１可促进ｍｉＲ⁃４３３⁃３ｐａｓｓｅｓｓｅｍｅｎｔ［Ｊ］．ＢａｌｋａｎＪＭｅｄＧｅｎｅｔ，２０２２，２４（２）：５５⁃表达进而发挥抑癌效应。６４．［１３］李燕，马俊旗，马蓉．ＬｎｃＲＮＡＯＳＥＲ１⁃ＡＳ１通过调控综上，ＰＯＵ２Ｆ１可与ｍｉＲ⁃４３３⁃３ｐ启动子区结合，ｍｉＲ⁃４３３⁃３ｐ影响宫颈癌细胞增殖、迁移及侵袭［Ｊ］．中低表达的ＰＯＵ２Ｆ１可促进ｍｉＲ⁃４３３⁃３ｐ表达，使ｍｉＲ⁃国细胞生物学学报，２０２０，４２（１１）：１９０９⁃１９１７．４３３⁃３ｐ表达升高，进而抑制胃癌细胞的增殖与［１４］万智双，熊丁，曹宸．ｍｉＲ⁃４３３⁃３ｐ靶向ＭＡＰＫ８对肝癌迁移。细胞ＭＨＣＣ９７Ｈ增殖、凋亡和迁移的调控作用［Ｊ］．中国免疫学杂志，２０２０，３６（１）：５７⁃６２．［参考文献］［１５］杨艳，张晓洁，马艳青，等．长链非编码ＲＮＡＰＣＧＥＭ１［１］ＰＡＲＫＪＣ．Ｃｈａｎｇｉｎｇｔｒｅｎｄｓｉｎｇａｓｔｒｉｃｃａｎｃｅｒｉｎｃｉｄｅｎｃｅ靶向ｍｉＲ⁃４３３⁃３ｐ调控结直肠癌细胞增殖、迁移及侵袭ａｎｄｍｏｒｔａｌｉｔｙ：ｔｈｅｒｏｌｅｏｆｕｐｐｅｒｅｎｄｏｓｃｏｐｙｉｎｌｏｗ⁃ｒｉｓｋ的分子机制［Ｊ］．中国老年学杂志，２０２０，４０（１４）：３０９７⁃ｃｏｕｎｔｒｉｅｓ［Ｊ］．Ｅｎｄｏｓｃｏｐｙ，２０２２，５４（７）：６６１⁃６６２．３１０１．［２］ＯＧＡＴＡＹ，ＨＡＴＴＡＷ，ＯＨＡＲＡＹ，ｅｔａｌ．Ｐｒｅｄｉｃｔｏｒｓｏｆ［１６］ＳＵＮＳ，ＷＡＮＧＸ，ＸＵＸ，ｅｔａｌ．ｍｉＲ⁃４３３⁃３ｐｓｕｐｐｒｅｓｓｅｓｅａｒｌｙａｎｄｌａｔｅｍｏｒｔａｌｉｔｙａｆｔｅｒｔｈｅｔｒｅａｔｍｅｎｔｆｏｒｅａｒｌｙｇａｓｔｒｉｃｃｅｌｌｇｒｏｗｔｈａｎｄｅｎｈａｎｃｅｓｃｈｅｍｏｓｅｎｓｉｔｉｖｉｔｙｂｙｔａｒｇｅｔｉｎｇｃａｎｃｅｒｓ［Ｊ］．ＤｉｇＥｎｄｏｓｃ，２０２２，３４（４）：８１６⁃８２５．ＣＲＥＢｉｎｈｕｍａｎｇｌｉｏｍａ［Ｊ］．Ｏｎｃｏｔａｒｇｅｔ，２０１７，８（３）：［３］ＣＨＥＮＹ，ＺＨＡＮＧＪ，ＧＯＮＧＷ，ｅｔａｌ．ｍｉＲ⁃５８８ｉｓａ５０５７⁃５０６８．ｐｒｏｇｎｏｓｔｉｃｍａｒｋｅｒｉｎｇａｓｔｒｉｃｃａｎｃｅｒ［Ｊ］．Ａｇｉｎｇ（Ａｌｂａｎｙ［１７］ＹＵＪ，ＺＨＡＮＧＨ，ＺＨＡＯＣ，ｅｔａｌ．ＣｉｒｃＲＮＡｃｉｒｃ＿ＮＹ），２０２０，１３（２）：２１０１⁃２１１７．０００８０３７ｆａｃｉｌｉｔａｔｅｓｔｕｍｏｒｇｒｏｗｔｈａｎｄｔｈｅＷａｒｂｕｒｇｅｆｆｅｃｔ［４］ＳＨＩＱ，ＷＡＮＧＹ，ＭＵＹ，ｅｔａｌ．ｍｉＲ⁃４３３⁃３ｐｉｎｈｉｂｉｔｓｖｉａｕｐｒｅｇｕｌａｔｉｎｇＮＵＣＫＳ１ｂｙｂｉｎｄｉｎｇｔｏｍｉＲ⁃４３３⁃３ｐｉｎｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎａｎｄｉｎｖａｓｉｏｎｏｆｅｓｏｐｈａｇｅａｌｓｑｕａｍｏｕｓｃｅｌｌｎｏｎ⁃ｓｍａｌｌｃｅｌｌｌｕｎｇｃａｎｃｅｒ［Ｊ］．ＴｈｏｒａｃＣａｎｃｅｒ，２０２２，１３ｃａｒｃｉｎｏｍａｂｙｔａｒｇｅｔｉｎｇＧＲＢ２［Ｊ］．ＣｅｌｌＰｈｙｓｉｏｌＢｉｏｃｈｅｍ，（２）：１６２⁃１７２．２０１８，４６（５）：２１８７⁃２１９６．［１８］ＳＵＺ，ＢＡＯＷ，ＹＡＮＧＧ，ｅｔａｌ．ＳＯＸ１２ｐｒｏｍｏｔｅｓｔｈｙ⁃［５］ＺＨＯＮＧＹ，ＨＵＡＮＧＨ，ＣＨＥＮＭ，ｅｔａｌ．ＰＯＵ２Ｆ１ｏｖｅｒ⁃ｒｏｉｄｃａｎｃｅｒｃｅｌｌｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎａｎｄｉｎｖａｓｉｏｎｂｙｒｅｇｕｌａｔｉｎｇｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｃｏｒｒｅｌａｔｅｓｗｉｔｈｐｏｏｒｐｒｏｇｎｏｓｅｓａｎｄｐｒｏｍｏｔｅｓｔｈｅｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｏｆＰＯＵ２Ｆ１ａｎｄＰＯＵ３Ｆ１［Ｊ］．ＹｏｎｓｅｉＭｅｄｃｅｌｌｇｒｏｗｔｈａｎｄｅｐｉｔｈｅｌｉａｌ⁃ｔｏ⁃ｍｅｓｅｎｃｈｙｍａｌｔｒａｎｓｉｔｉｏｎｉｎＪ，２０２２，３（６）：５９１⁃６００．ｈｅｐａｔｏｃｅｌｌｕｌａｒｃａｒｃｉｎｏｍａ［Ｊ］．Ｏｎｃｏｔａｒｇｅｔ，２０１７，８（２７）：［１９］ＺＨＵＨＹ，ＣＡＯＧＹ，ＷＡＮＧＳＰ，ｅｔａｌ．ＰＯＵ２Ｆ１ｐｒｏ⁃４４０８２⁃４４０９５．ｍｏｔｅｓｇｒｏｗｔｈａｎｄｍｅｔａｓｔａｓｉｓｏｆｈｅｐａｔｏｃｅｌｌｕｌａｒｃａｒｃｉｎｏｍａ［６］曹毛毛，李贺，孙殿钦，等．２０００—２０１９年中国胃癌流ｔｈｒｏｕｇｈｔｈｅＦＡＴ１ｓｉｇｎａｌｉｎｇｐａｔｈｗａｙ［Ｊ］．ＡｍＪＣａｎｃｅｒ行病学趋势分析［Ｊ］．中华消化外科杂志，２０２１，２０Ｒｅｓ，２０１７，７（８）：１６６５⁃１６７９．（１）：１０２⁃１０９．［２０］ＸＩＥＣＨ，ＣＡＯＹＭ，ＨＵＡＮＧＹ，ｅｔａｌ．Ｌｏｎｇｎｏｎ⁃［７］ＸＵＥＸＱ，ＹＵＷＪ，ＳＨＡＯＸＬ，ｅｔａｌ．ＲａｄｉｏｍｉｃｓｍｏｄｅｌｃｏｄｉｎｇＲＮＡＴＵＧ１ｃｏｎｔｒｉｂｕｔｅｓｔｏｔｕｍｏｒｉｇｅｎｅｓｉｓｏｆｈｕｍａｎ１８ｂａｓｅｄｏｎｐｒｅｏｐｅｒａｔｉｖｅＦ⁃ｆｌｕｏｒｏｄｅｏｘｙｇｌｕｃｏｓｅＰＥＴｐｒｅ⁃ｏｓｔｅｏｓａｒｃｏｍａｂｙｓｐｏｎｇｉｎｇｍｉＲ⁃９⁃５ｐａｎｄｒｅｇｕｌａｔｉｎｇｄｉｃｔｓＮ２⁃３ｂｌｙｍｐｈｎｏｄｅｍｅｔａｓｔａｓｉｓｉｎｇａｓｔｒｉｃｃａｎｃｅｒｐａ⁃ＰＯＵ２Ｆ１ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ［Ｊ］．ＴｕｍｏｕｒＢｉｏｌ，２０１６，３７（１１）：ｔｉｅｎｔｓ［Ｊ］．ＮｕｃｌＭｅｄＣｏｍｍｕｎ，２０２２，４３（３）：３４０⁃３４９．１５０３１⁃１５０４１．［８］ＹＡＭＡＳＡＫＩＪ，ＨＩＲＡＴＡＹ，ＯＴＳＵＫＩＹ，ｅｔａｌ．ＭＥＫｉｎ⁃［２１］ＬＩＦ，ＷＡＮＧＴ，ＨＵＡＮＧＹ，ｅｔａｌ．ＰＯＵ２Ｆ１ｉｎｄｕｃｅｓｔｈｅｈｉｂｉｔｉｏｎｓｕｐｐｒｅｓｓｅｓｍｅｔａｓｔａｔｉｃｐｒｏｇｒｅｓｓｉｏｎｏｆＫＲＡＳ⁃ｉｍｍｕｎｅｅｓｃａｐｅｉｎｌｕｎｇｃａｎｃｅｒｂｙｕｐ⁃ｒｅｇｕｌａｔｉｎｇＰＤ⁃Ｌ１ｍｕｔａｔｅｄｇａｓｔｒｉｃｃａｎｃｅｒ［Ｊ］．ＣａｎｃｅｒＳｃｉ，２０２２，１１３（３）：［Ｊ］．ＡｍＪＴｒａｎｓｌＲｅｓ，２０２１，１３（２）：６７２⁃６８３．９１６⁃９２５．［２２］ＨＵＪ，ＹＡＮＧＤ，ＺＨＡＮＧＨ，ｅｔａｌ．ＵＳＰ２２ｐｒｏｍｏｔｅｓ［９］ＳＡＴＯＹ，ＯＫＡＭＯＴＯＫ，ＫＡＷＡＧＵＣＨＩＴ，ｅｔａｌ．Ｔｒｅａｔ⁃ｔｕｍｏｒｐｒｏｇｒｅｓｓｉｏｎａｎｄｉｎｄｕｃｅｓｅｐｉｔｈｅｌｉａｌ⁃ｍｅｓｅｎｃｈｙｍａｌｍｅｎｔｒｅｓｐｏｎｓｅｐｒｅｄｉｃｔｏｒｓｏｆｎｅｏａｄｊｕｖａｎｔｔｈｅｒａｐｙｆｏｒｌｏｃａｌ⁃ｔｒａｎｓｉｔｉｏｎｉｎｌｕｎｇａｄｅｎｏｃａｒｃｉｎｏｍａ［Ｊ］．ＬｕｎｇＣａｎｃｅｒ，ｌｙａｄｖａｎｃｅｄｇａｓｔｒｉｃｃａｎｃｅｒ：ｃｕｒｒｅｎｔｓｔａｔｕｓａｎｄｆｕｔｕｒｅｐｅｒ⁃２０１５，８８（３）：２３９⁃２４５．ｓｐｅｃｔｉｖｅｓ［Ｊ］．Ｂｉｏｍｅｄｉｃｉｎｅｓ，２０２２，１０（７）：１６１４．［２３］ＸＩＡＯＹ，ＬＩＵＳ，ＬＩＪ，ｅｔａｌ．ＴｈｅＰＯＵ２Ｆ１／ｍｉＲ⁃４４９０／［１０］中华人民共和国国家卫生健康委员会医政医管局．胃ＵＳＰ２２ａｘｉｓｒｅｇｕｌａｔｅｓｃｅｌｌｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎａｎｄｍｅｔａｓｔａｓｉｓｉｎ癌诊疗指南（２０２２年版）［Ｊ］．中华消化外科杂志，ｇａｓｔｒｉｃｃａｎｃｅｒ［Ｊ］．ＣｅｌｌＯｎｃｏｌ（Ｄｏｒｄｒ），２０２０，４３（６）：２０２２，２１（９）：１１３７⁃１１６４．１０１７⁃１０３３．［１１］李玉琴，王凯，敖丽，等．ｍｉＲ⁃１４２⁃５ｐ通过ＤＮＡ甲基转（收稿时间：２０２２⁃１１⁃２２修回时间：２０２２⁃１２⁃１０）移酶１抑制胃癌细胞增殖迁移的机制研究［Ｊ］．中国（责任编辑：苏晓娜，张翔）临床药理学与治疗学，２０１９，２４（１２）：１３２８⁃１３３４．［１２］ＰＥＨＬＥＶＡＮÖＺＥＬＨ，ＤＩＮÇＴ，ＴＩＲＹＡＫＩＲＳ，ｅｔａｌ．