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时间：2022-11-09
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双缩脲法测定血清总蛋白临床生化实验室
1一、实验目的掌握双缩脲法测定血清总蛋白的原理及操作。了解血清总蛋白测定的临床意义。
2二、实验原理尿素被加热，则两分子的尿素放出一分子氨而形成双缩脲。双缩脲在碱性环境中，能与硫酸铜结合成紫红色的化合物，此反应称为双缩脲反应。
3二、实验原理蛋白质分子中含有肽键（—CO—NH—）与双缩脲结构相似，故也能进行此反应。双缩脲反应可作为蛋白质定量测定的依据。
4二、实验原理紫红色络合物在波长为540nm处的吸光度与溶液中蛋白质的含量在一定范围内成正比关系，经与同样处理的蛋白质标准液比较，即可求得溶液中蛋白质的含量。C测=——×C标A测A标
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6三、实验操作混匀，置25℃水浴放置30min或37℃水浴放置10min，以空白管调零，在540nm波长处进行比色，分别读取各管的吸光度值。
7四、结果计算计算公式：血清总蛋白（g/L）=————×C标AU-ARB-ABAS-ARB参考范围：正常人：60~80g/L
8五、方法学评价目前常用的测定血清总蛋白的方法有如下五种经典方法：双缩脲法（Biuret法）：1~2mg定氮法：灵敏度0.2~1.0mgFolin－酚试剂法（Lowry法）：50~100μg紫外吸收法：5μg考马斯亮蓝法（Bradford法）：1~5μg
9五、方法学评价双缩脲法优缺点：优点操作简单，使用方便，作为临床测定血清总蛋白的首选常规方法且重复性好。缺点灵敏度较低，比酚试剂法低100倍左右。
10六、临床意义血清总蛋白降低1、蛋白合成障碍：肝功能严重受损2、蛋白质丢失增多：严重烧伤，大量血浆渗出；大出血；肾病综合症等3、营养不良或消耗增加：如低蛋白饮食；慢性消耗性疾病：结核病、恶性肿瘤等4、血浆稀释：静脉注射过多低渗溶液或各种原因引起的水钠潴留。
11六、临床意义血清总蛋白升高1、蛋白合成增加：多见于多发性骨髓瘤患者，主要是因为异常球蛋白增加2、血浆浓缩：急性脱水、呕吐、腹泻等。
12七、注意事项双缩脲反应并非是蛋白质特有的颜色反应！凡分子内含有2个或2个以上肽健（—CO—NH—）的化合物均可呈双缩脲反应。双缩脲法显色反应和蛋白质中肽健数成正比关系，与蛋白质的种类、分子量及氨基酸的组成无明显关系。
13七、注意事项黄疸血清、严重溶血、葡萄糖、酚酞等对本法有明显干扰，故用标本空白管来消除；因双缩脲试剂中含有CuSO4具有颜色，故用试剂空白管消除干扰。
14七、注意事项高脂血症混浊血清会干扰比色，可采用下列方法消除：取2支离心管，各家待测血清0.1ml，再加蒸馏水0.5ml和丙酮10ml，混匀后离心。因血清取量少，取量尽量准确。碱液对玻璃仪器有腐蚀作用，尽量用塑料瓶装。
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