实验五-----二氯酚靛酚测vcppt课件

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实验五2,6-二氯酚靛酚滴定法测定L-抗坏血酸的含量生化分析实验

1一、目的掌握滴定法测定Vc含量的基本原理和操作。2

2二、原理还原型Vc能与氧化剂染料2,6-二氯酚靛酚作用，染料本身被还原成无色的衍生物，同时还原态的Vc被氧化成脱氢Vc。氧化型2，6-二氯酚靛酚（弱碱性，蓝色）还原型VC氧化型VC3还原型2，6-二氯酚靛酚（弱酸性，无色）氧化型染料（弱酸性，红色）H+H+

3VC滴定法在滴定管中弱碱性的2，6-二氯酚靛酚染料是蓝色的。染料滴入锥形瓶中，草酸使染料变成弱酸性，再与VC作用被还原成无色。随着染料用量增加，VC还原能力下降，直到终点，溶液由无色红色。染料滴定消耗的量与瓶中的VC浓度成正比。规定：三角瓶中，由无色变为微红色，15秒钟内不消失，是滴定终点。4

4注意1.操作要尽可能快，并防止与铁铜器具接触，以减少VC的氧化。2.样品提取液避免强光直射。3.草酸具有抑制氧化酶，保护VC作用。草酸在颜色反应中还提供了酸性条件。补充样品有颜色时，测定前添加2～3mL二氯乙烷萃取VC。在滴定过程中当二氯乙烷由无色变为粉红色时，即达终点。5

5三、实验材料及设备1.材料新鲜黄瓜2.仪器电子天平3.器材碱式滴定管：25mL×1移液管：20mL×1容量瓶：100mL×1量筒：100mL×1锥形瓶：100mL×5研钵、漏斗：各16

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82.草酸溶液的配置①每组自配2%的草酸液100mL。②空白滴定：取20ml草酸液放入100mL三角瓶中，用2,6-二氯酚靛酚滴定至终点（锥形瓶中出现粉红色在15秒内不消失为止），记录染料消耗量V0=？。9

9103、样品的测定吸取待测样液20mL，放入锥形瓶中，立即用2,6-二氯酚靛酚溶液滴定至终点。记录滴定液体积。平行操作三次，取平均值。Vm=（V1+V2+V3）×1/3样品VC消耗的体积Vn=Vm-V0

104、标定①配制：每班选代表2人，配制2%草酸溶液1000mL。另选2人，参照Vc=20mg剂量称取，精确记录本班G=？。用2%草酸溶解标准Vc至1000mL。②计算：本班配制的标准VC实际浓度=？③滴定：各组取标准Vc液20mL，放入“标定”锥形瓶中，用2,6-二氯酚靛酚滴定至终点。④记录：标定时染料消耗的毫升数V标定=？。11

11六.结果处理1.计算K值K值：1mL染料所能氧化抗坏血酸的mg数。K=×(mg/mL)标定12公式改了取20ml滴定定容1000ml各班标定，称取Vc的mg数-V0

122.Vc的含量计算生物材料中Vc的含量（mg/100gFW）=13Vn×K×样液定容体积×100取样液滴定体积×W

13七、思考题用滴定法测定生物材料中Vc的含量有什么优缺特点?答：优点：（1）器材简易，不耗电。（2）方法简单。（3）不必画标准曲线，计算方便快捷。缺点：（1）滴定终点有视觉误差。（2）染料试剂颜色深，看滴定管体积刻度困难。……14

14八、讨论分析如果不操作空白滴定，则另一种计算方法的K2=？计算的样品V’C含量=？两种方法计算结果是否有差别？15

15开始实验16滴定终点红色