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1、流式细胞术在白血病诊断中的应用一简介FCM：集激光、电子、光电测量、计算机、荧光化学、单抗的高科技仪器。对处在快速直线流动状态中的单个细胞或生物颗粒进行多参数的、定量分析和分选的技术。分两类：台式机（临床型）大型机（cellsorting).科研用。BDFACSVantageSEFCM的结构FCM的结构细胞流动室；光源；聚光系统；信号检测器；电子计算机；细胞分选装置。光源细胞流动室聚光系统信号监测器数据的存储、显示与分析数据的存储：listmode显示：单参数直方图(histgram);：常用于分析DNA等；双参数：二维点图等（dotplot)；等高图：(contour)
2、三维等高图：3Dplot设门（gating):DataAcquisition-Listmode一定条件下，荧光强度与细胞内DNA含量成正比。只反应一个参数与细胞数量间的关系，不能显示两个独立参数与细胞的关系。ImmunofluorescenceFlowCytometrycont.DatadisplayedGreenFluorescenceIntensityNumberofCellsUnstainedcellsFITC-labeledcellsOneParameterHistogramRedFluorescenceIntensityGreenFluorescenceInte
3、nsityTwoParameterHistogramContourplot3Dplot:细胞多的地方，山峰高。FCM检测常用参数 内部参数—散射光测定前向角散射(forwardscatterFSC):与激光束平行的信号。与被测细胞大小有关。侧向角散射（sidescatterSSC):与激光束呈90°的光信号。与细胞内结构和颗粒物质多少有关。采用FSC、SSC组合，可区分淋巴细胞、单核细胞、粒细胞等群体。FCM常用参数 外部参数—荧光测量荧光素探针标记的细胞所发荧光。荧光信号强弱、多少与细胞的抗原量、内含物多少有关。常用的荧光显色剂：FITC：PE：藻红蛋白PerCP；PI
4、：碘化丙啶，测定DNA含量。临床常用三色荧光检测，现有四色分析。CD45vsSSC设门CD45为造血细胞（红系除外）的共同抗原。避免杂质细胞的沾染。CD45:淋巴细胞>单核细胞>成熟粒细胞>原幼细胞在FCM分析时特别注意：细胞的分化成熟、细胞内部结构及其分化抗原的逐渐增减是渐进过程，非突变。故同时获知一个细胞的多种参数方能正确判断细胞属性。当细胞发生克隆增殖后，可出现抗原量变、丢失和错译表达。细胞抗原的阳性率及荧光强度是同等重要的指标。FCM可采用的标本单个细胞，新鲜标本，抗凝保存：PB；BM；（有时BM活检标本）LN（包括FNA）；CSF；组织浸润FNA或活检标本；急性
5、白血病FCM分析白血病细胞的抗原表达一定程度遵循正常细胞抗原表达的规律。白血病细胞为肿瘤性生长，可出现正常细胞表达以外的异常现象，如缺失、错译表达等。目前未发现白血病特异性抗原，须多参数分析。临床原/幼细胞群定性比定量更为重要。抗体的选择：常用抗体选择：核心McAbs:确定淋系或髓系（系特异性）髓系：CD33、CD13、CD14，cMPOB-cell:CD19、CD10、cCD22CD20T-cell:CD7、CD2、CD5、cCD3红系：GlyA巨核细胞：CD41、CD61非系列特异性：CD34、DR、CD45ALpanelCD7/CD117/CD45---protoc
6、alHLA-DR/CD13/CD45CD14/CD2/CD45CD19/CD5/CD45CD33/CD34/CD45CD20/CD10/CD45CD64,117,13,33,14,64—myeloid19,10,20—Blineage7,2,5—TlineageDR,34immatureAML常见CD表达FABSubtypeCommonPhenotypeComments/VariationsM0DR.CD13,CD33,CD34,CD7,cMPO*GenerallynegativeforlymphoidmarkersM1SimilartoM0exceptCD15M2DR,
7、CD13,CD33,moreCD15,lessCD34CD19(+)--t(8;21)favorableprognosisM3DR(-)*,CD13,CD15,CD33,CD34-/+,CD2(+),DR(-)inmaturingAML,considerM3.Myeloid/naturalkillercellALCD56(+).M4/M5DR,CD15,CD14,CD33,CD13,CD4weakCD2(+),considerM4EoM6DR,CD13-/+,CD33+/-,CD34,CD45weakMatureformsex
