流式细胞术在白血病中的应用医学ppt

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1、流式细胞术在白血病/淋巴瘤分型和监测中的应用1世界卫生组织血液肿瘤分类方案（1999年）“新分类方案的基本原则是：结合形态学、免疫表型、遗传改变和临床特征来鉴定疾病的‘真实’本质”。“这为世界各国肿瘤学家和病理学家提供了一个全新的与令人兴奋的合作交流新篇章，必将极大促进人们对血液肿瘤的治疗与认识。”（美国临床肿瘤协会，临床肿瘤杂志17卷3835-3849页，1999年）更重要的是提供了疾病分类与治疗选择和预后判断的较明确关联性，开启了血液肿瘤靶向性治疗和个性化方案的新时代。白血病分子诊断的意义系统诊断2白血病初发异常标记精确诊断准确预后

2、指导治疗科研资料残留监测靶向治疗免疫/遗传学靶标MICM诊断3WHO血液肿瘤新分类实验技术平台实施WHO血液肿瘤新分类方案高度依赖流式细胞、细胞遗传和分子生物学实验技术平台以及掌握这类实验技能并具有专业知识的人员。45InvestigativeToolsforMMdiagnosisandManagement(2008ASHEducationProgramBookp298)PatientEvaluation诊断单克隆蛋白数量和特征血清蛋白电泳和免疫球蛋白定量24小时尿蛋白；总蛋白；本周蛋白尿和血清免疫固定血清自由轻链和比例骨髓检查和骨髓活

3、检Bonemarrowaspirationandbiopsy组化免疫分型-克隆检定，及通过CD38/CD56/CD19/CD45抗体组合能从90余例患者正常浆细胞中找到检测残留MM细胞终末器官损害评价全血细胞计数；生化检查:血清肌酐和骨钙测定预后评估球蛋白，betta-2微球蛋白,LDH,CRP骨髓细胞遗传学和FISHt(4;14),t(14;16),del17p针对某些特定患者的特殊研究6传统流式细胞术的临床应用细胞计数：CD4、CD34DNA含量：多倍数、S期结果是数据、准确性依赖于良好的质控传统流式细胞术在白血病免疫表型中的应用单

4、参“白血病表型”，阳性比率大多数细胞为肿瘤细胞多为形态学/细胞化学后的确认数据由临床医师判断高分辨流式细胞的优点以多参数正常抗原表达为基础结果类似病理报告用于原发性诊断与鉴别诊断用于疾病分期，治疗选择疗效监测，预后判断流式细胞术骨髓-异质性系统中的应用多系列Lymphocyte(T,B,NK)MonocyteNeutrophilEosinophilBasophilErythrocyte骨髓中各系列细胞处于连续性成熟阶段必须能涵盖所有细胞7应该使用何种抗体？所有抗体必须为标准的商业化试剂没有什么“秘密武器”或者专门特异的抗体抗体的联合应用

5、能使你从有限的标本中得到最大化的信息量对正常抗原表达的正确认识能帮助你有效地鉴别疾病状态相关的改变89高分辨流式细胞术能够鉴别和分类所有骨髓细胞可以对每一个细胞进行多特征性的检测并对其相应的系列和成熟的阶段进行分类至少检测一万个细胞，分辨率达到0.5%10CD45/SS11Wood(2004)MethodsCellBiology75:559-576正常粒系成熟模式12正常B系成熟Wood(2004)MethodsCellBiology75:559-576白血病相关的免疫表型特点表达交叉系列的抗原非同步抗原共表达：CD34与CD15、CD

6、11b、CD56、CD14抗原的过度表达：早前B-ALL中CD10抗原表达缺失：泛T抗原易位抗原表达：CSF中TdT+淋巴细胞，骨髓中胸腺发育阶段的T淋巴细胞光散射异常：FSC和SSC14AML-M015AML-M216AML-M317AML-M418AML-M519B-ALL20Burkitt淋巴瘤/白血病成熟B-ALL21MALT+G22MALT+BAUL23B-CLL/SLL24HCL2526大B细胞淋巴瘤MM27T-ALL28NK-LGL29报告包括出现或缺乏的异常细胞群异常免疫表型相比正常细胞群的抗原强度增强，减弱，缺失定量层

7、面的判断相对于全部CD45阳性细胞(WBCs)出现的其它细胞群303132TCRVβ克隆小结流式细胞术有助于血液系统异常疾病的诊断更加确定的诊断排除其他疾病有助于细分亚型更准确的原始细胞辨别和定量有助于预后判断治疗后监测快速33免疫表型分析与FAB分型基于不同的参数对白血病进行分型，两者的结果可一致或不一致；对有些病例，尤其是髓系白血病亚型，免疫表型分析并非特异；对于复杂的病例，需结合多种检查，如特异性染色体核型分析或融合基因综合判断。34MRD背景目前由于多种化疗药的联合应用，使多数白血病患者可以获得形态学的完全缓解（CR）。但多数患

8、者不能维持长期缓解，仍有相当多的患者再次复发。复发的主要原因是患者体内存在少量的形态学难以辨认的残存白血病细胞。如果能够准确检测患者体内残存的白血病状态，可以有的放矢地进行治疗，使患者避免许多不必要的痛苦。