流式细胞术在风湿免疫病中的应用

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1、流式细胞术风湿免疫病北京协和医院风湿免疫科赵丽丹常用的流式细胞仪与流式分析软件BD-FACSDivaFlowJoCellQuestWinMdiFCSExpressCFlowSamplerAnalysis（AccuriC6FlowCytometer）ModFitLT—增殖分析骨髓和器官移植基础医学流式细胞仪的临床应用免疫病血液病肿瘤性疾病感染性疾病外周血淋巴细胞T淋巴细胞NK细胞外周血免疫细胞亚群CD16+CD56+T辅助细胞CD3+CD19+T8细胞B淋巴细胞CD4+CD8+NaïveTCD45RA+CD45RO-MemoryTCD45RA-CD45R

2、O+CD95DRCD38活化标志细胞毒T细胞抑制型T细胞CD28＋CD28－增殖标志Ki-67DC细胞pDC抑制型T细胞CD11c-CD123highCD11c+CD123low/-免疫细胞的性质吞噬能力、分泌细胞因子的能力免疫调节功能发育、分化和成熟迁移和趋化能力增殖与凋亡表型和数量流式细胞仪在免疫病中的应用1234了解体内免疫功能状态—细胞亚群分析♣细胞免疫：T细胞/naïveT/活化T♣体液免疫：B细胞辅助疾病诊断♣HLA-B27♣HLA-B5♣HLA-DR4探索疾病的发病机理、病程、预后♣Th17、Treg♣BR3、TACI、BCMA♣血清中多

3、种细胞因子监测指导临床治疗方案♣美罗华—B细胞♣Belimumab—B细胞♣预防性抗PCP流式细胞术在免疫学中的应用免疫学研究中常用的流式方法细胞表面染色荧光选择与配伍避免交叉污染调节补偿胞内分子及细胞因子染色破膜/固定剂同时测定多种细胞因子PMA/Ionomycin+Golgi阻断剂--CD4荧光的选择细胞增殖及凋亡分析CFSE增殖分析DNA分析PI-AnnexinⅤCasepase检测细胞分选流式细胞术对免疫细胞亚群测定的范例Anti-CD20不同发育阶段B细胞的影响临床应用抗CD20单抗治疗中监测淋巴细胞亚群的临床意义初始治疗B细胞显著增多→应用

4、价值；CD4+T细胞显著减少→应用风险；治疗中的监测B细胞清除效应→预测治疗效果（临床效果与B细胞清除相关，*长寿命浆细胞）随访中的病情监测B细胞恢复－病情复发－强化治疗；感染风险评估细胞免疫功能与机会性感染指导临床治疗：加强免疫抑制治疗vs经验性抗感染治疗CD4/CD8（参考值1～2）＞2：细胞免疫功能过度活跃<1：病毒感染、恶性肿瘤CD4<200：PCP、隐球菌、分支杆菌感染的风险↑NaïveT、CD28＋的CD4减少易发生机会性感染免疫缺陷病的诊断和定位X连锁无丙种球蛋白血症XLA外周血和淋巴组织中B细胞减少或缺失，Ig缺乏男性婴幼儿，6~9月发

5、病，反复化脓性感染普通变异性免疫缺陷病CVIDIgG显著低下，B细胞减少或正常，naïveT减少青壮年，反复化脓性呼吸道感染选择性IgA缺陷、选择性IgG亚类缺陷高IgM综合征X连锁重症联合免疫缺陷SCIDT细胞和NK细胞减少，B细胞可正常新生儿、婴幼儿，病毒、PCP、念珠菌、败血症Molecularsastherapeutictarget56Rituximab/ocrelizumab;2.Anti-CD40L;3.Atacicept/Belimumab;Bcelltolerogen--Abetimussodium;5.Abatacept;6.Epra

6、tuzumab;FC对于基础研究的重要性细胞分选细胞增殖基因研究—GFP标签高通量的细胞因子测定——CBA……Scienceishard.Flowcytometryshouldbeeasy.CFSEHCSLECD4+T：CDI=0.98CDI=1.72CDI=5.25CFSE细胞增殖的流式测定CBA（CytometricBeadArray）assayTerasawaHetal.ClinCancerRes2002;8:41-53细胞凋亡的流式测定本实验室近期工作的相关文章1.ZhaoLD,LiY,SmithMFJr,WangJS,ZhangW,TangF

7、L,TianXP,ZhangFC,ZhangX.ExpressionsofBAFF/BAFFreceptorsandtheircorrelationwithdiseaseactivityinChineseSLEpatients.Lupus.2010Nov;19(13):1534-49.(SCI=2.586)2.YueC,YouX,ZhaoL,WangH,TangF,ZhangF,ZhangX,HeW.TheeffectsofadalimumabandmethotrexatetreatmentonperipheralTh17cellsandIL-17/I

8、L-6secretioninrheumatoidarthritispatients.Rheum