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时间：2022-10-29
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根瘤菌的分离与鉴定
1(1)照相(2)挖掘和根瘤保存根瘤选取：大个、新鲜、粉红色、尽量多取。根瘤采集：1.主根上可以剥取少量根皮以保证根瘤完整。2.侧根上的可带少许根。采集
2采集农大豆2号保豆3号
3保存每个单株植物的根瘤收集在一个卫生纸包中，每个采集点的多个植株放在一个装有硅胶的自封袋中。
4分离及纯化用无菌水浸泡干燥根瘤菌直至其复原。2.用95%的酒精浸泡3~5分钟，用5%的NaClO3浸泡1分钟，用无菌水清洗5~7次（换水）。（在超净台上操作，并且在酒精灯附近，防止染菌）
5分离及纯化(1)根瘤浸泡(2)根瘤消毒
6分离及纯化3.用牙签（灭菌时尖头朝上，平头朝下）的平头端在灭菌的玻璃平皿上将根瘤刺破（必要时可以滴加一滴无菌水）。用灭菌接种环蘸取菌液在YMA固体培养基上划线。用灭菌接种环蘸取同种菌液，在载玻片上进行革兰氏染色，镜检。
7THANKYOUSUCCESS2022/10/198可编辑
8分离及纯化消毒刺破划线
9分离及纯化4.待平板出现菌落后，观察，选取目的菌落再次划线纯化，镜检。5.纯化后的菌划线在试管斜面培养基上，供保菌。
10分离及纯化挑菌，摇菌稀释1万倍稀释2万倍稀释100万倍
11保菌使用YMA液体+20%甘油，吹打斜面上的菌，吸取保存。使用YMA液体+20%甘油，吸取摇好的单个菌斑菌液。
12提取基因组DNA260/280:1.97260/230:2.02浓度：570ng/μl
13鉴定16SrDNA序列测定：方法同书。其中：dNTP：2.5mm引物：10μm测序后，在NCBIblast中进行比对，一般情况下，相似性能达到99%左右。
14THANKYOUSUCCESS2022/10/1915可编辑
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