细菌的分离与鉴定.ppt

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1、第二节分离特定的微生物并测定其数量用液体培养基分离、培养用固体培养基分离、培养二元培养物分离、培养选择培养分离单孢子分离微生物分离方法要分离微生物，必须根据它的特点，包括营养、生理、生长条件等，采用选择培养的方法，经过一定时间的培养后，使这种微生物在群落中的数量不断增加，在通过平板稀释法等进行纯培养分离微生物纯种分离将多种混杂微生物，经某种技术或方法分离成纯种的过程纯培养（pureculture）在适宜条件下培养纯种获得的培养物（群体）单个微生物在适宜的固体培养基表面或内部生长、繁殖到一定程度可以形成肉眼可见的、有一定形态结构的子细胞群体

2、，称为菌落(colony)。菌落一个菌落是一个纯种，也是一个纯培养；单个微生物只在固体培养基上形成菌落；在液体培养基中不会形成菌落同一细菌在不同的培养平板上形成不同的特征菌落菌落形态包括菌落的大小、形状、边缘、光泽、质地、颜色和透明程度等。每一种细菌在一定条件下形成固定的菌落特征。不同种或同种在不同的培养条件下，菌落特征是不同的。这些特征对菌种识别、鉴定有一定意义。微生物样品多种混杂某种方法分散成单个微生物平板培养单菌落每个菌落为纯种（纯培养）单菌落转接培养纯种（纯培养）（一）、微生物纯种分离的原理和方法一、用固体培养基（营养琼脂平板）分

3、离纯种平板分离法：将单个微生物分离和固定在固体培养基表面或里面，每个孤立的活微生物体经过生长、繁殖均可形成单个菌落微生物接种方法常见的有平板划线法和稀释涂布平板法。1.平板划线法通过接种环在琼脂固体培养基表面连续划线的操作，将聚集的菌种逐步稀释分散到培养基的表面。纯化细菌2.稀释涂布平板法将菌液进行一系列的梯度稀释，然后将不同稀释度的菌液分别涂布到琼脂固体培养基的表面进行培养。在稀释度足够高的菌液里，聚集在一起的微生物将分散成单个细胞，从而能在培养基表面形成单个的菌落。稀释涂布平板法操作过程分两个步骤，即系列稀释操作和涂布平板操作。（二）

4、、纯种平板分离的不同方法从土壤中分离纯微生物104/ml103/ml102/ml101/ml涂布平板法稀释倒平板法1、涂布平板法（spreadplatemethod)2、稀释倒平板法（倾注平板法）（pourplatemethod)分区划线法（蛇形线法）操作图第一区划线灭菌接种环第二区划线灭菌接种环第三区划线灭菌接种环3、平板划线法（streakplatemethod）分区划线法适用范围：适用于浓度较大的样品连续划线法操作图连续划线法适用范围：适用于浓度较小的样品二、选择培养分离创造适于目的微生物生长条件原理促使目的微生物快速生长呈优势菌抑

5、制非目的微生物生长从混杂微生物中分离目的微生物1、利用选择培养基进行直接分离选择培养基只允许特定微生物生长，而同时抑制或阻止其他微生物生长的培养基选择培养基加入青霉素的培养基:分离酵母菌、霉菌等真菌加入高浓度食盐的培养基:分离金黄色葡萄球菌不加氮源的无氮培养基:分离固氮菌不加含碳有机物的无碳培养基:分离自养型微生物加入四环素、卡那霉素等抗生素的培养基:分离导入了目的基因的受体细胞可抑制细菌、放线菌细胞壁主要成分肽聚糖的合成其细胞壁是由纤维素、几丁质、葡聚糖组成1、尿素的利用尿素是一种重要的农业氮肥。尿素不能直接被农作物吸收。土壤中的细菌将

6、尿素分解成氨之后才能被植物利用。2、细菌利用尿素的原因土壤中的细菌分解尿素是因为它们能合成脲酶CO(NH2)2脲酶+CO2NH3+H2O土壤中分解尿素的细菌的分离与计数原理：培养基的氮源为尿素，只有能合成脲酶的微生物才能分解尿素，以尿素作为氮源。缺乏脲酶的微生物由于不能分解尿素，缺乏氮源而不能生长发育繁殖，而受到抑制，所以用此培养基就能够选择出分解尿素的微生物。（一）筛选菌株15.0g琼脂1.0g尿素10.0g葡萄糖0.2gMgSO4`7H2O2.1gNaH2PO41.4gKH2PO4土壤中分解尿素的细菌的分离与计数所需培养基：①从物理性

7、质看此培养基属于哪类？从功能上属于哪类培养基？固体培养基②在此培养基中哪些作为碳源、氮源？碳源：葡萄糖、尿素氮源：尿素选择培养基（二）统计菌落数目1、显微镜直接计数：利用血球计数板，在显微镜下计算一定容积里样品中微生物的数量缺点不能区分死菌与活菌；不适于对运动细菌的计数计数板是一块特制的厚玻璃片，玻片上有四个槽构成三个平台，中央平台又由一短槽隔成两半，其上各刻有一小方格网，每个方格网共分九个大格，中央的一大格作为计数用，称为计数室。****#####血球计数板计数室有两种刻度1大格=16中格25×16=400小格1大格=25中格16×25

8、=400小格3.计算公式(1)16格×25格的血球计数板计算公式:酵母细胞数/ml=100小格内酵母细胞个数/100×400×104×稀释倍数(2)25格x16格的血球计数板计算公式:酵母