病原细菌分离与鉴定

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1、病原细菌的分离与鉴定发布日期：2009-05-09浏览次数：827字号：［大中小］一、实验目的系统学习兽医临床病原细菌的分离M鉴定技术，促进学生系统掌握各类病原细菌的基本特性与实验诊断技术，增强学牛应用所学知识解决牛产实践过程中的传染病的诊断和防控问题的能力，为预防、控制和消灭畜禽病原微牛物，保障畜牧业牛产的健康发展服务。二、知识背景细菌分离是细菌学检验中的极其重要的环节。正确的分离冇助于很快得到可疑的致病菌，对疫病的诊断与防控至关重要。在细菌分离时应注意的事项：1.病料采集（1）病料的利啖主要决定于疫病的性质，一般方法为：%1全身感染一血液及内脏；%1局部感染一病患部位；%1特殊病例一特殊

2、处理。特殊情况的匸确处理与操作者的专业知识有很大关系。无论全身或局部感染，均应采含菌最多或病变明显的纟R织（2）病料的釆集时间也应特别注意：%1活体病料一应考虑病原在疾病发展过程屮部位的变化：%1患畜死后一应立即采集病料，越早越好。2.无菌操作无菌操作是指在微牛物研究过程中，既要避免各种外界的微牛:物进入操作対象乂要杜绝操作对象污染周围环境的操作技术。无菌操作是対微牛•物学工作者最基本的要求，必须经过严格训练才能形成无菌操作素养。不论何种情况下，头脑中都应该有这个概念。无菌操作贯穿于整个分离过程，例如：病料的釆集、器材的准备、具体的操作。所用器械及物品均应事先灭菌备用，金属器具包装后高压灭菌

3、或煮沸30min,玻璃器皿可高压灭菌也可十热灭菌，胶皮塞、培养棊等则要高压灭菌。3•培养基培养基是指山人工方法配合而成的，用于微牛物培养、分离、鉴别、研究和保存菌种用的混合营养制品。（1）制作培养基的基本原则依据细菌的物质代谢要求和营养需要，必须含有细菌牛长繁殖所需要的碳源、氮源、矿物质以及牛长环境条件。（2）制作培养基的基木要求%1适宜的水分和各种营养物质；%1适宜的酸碱度与渗透压；%1不含抑制细菌生长的物质；%1应均质透明；%1应彻底灭菌；%1対某些微牛•物必须提供一•些特殊物质。（3）培养基的种类%1基础培养基：含有一般细菌生长繁殖需耍的基本营养物质；口J作为一些特殊培养基的基础成分。

4、%1加富培养基：在基础培养基中加入某些特殊营养物质（如血液/血清、酵母浸膏或牛长因子等）；用以培养对营养要求高的微生物。%1选择培养基：利用细菌対某种或某些化学物质的敏感性不同；在培养基中加入这类物质,利于所需分离的细菌牛长，而抑制不需要的细菌牛长，从而达到分离某种微牛物的口的。%1鉴別培养某：是一类含冇某种特定化合物或试剂的培养基。某种细菌在这种培养基上培养示，产生某种代谢产物，能与这种特定化合物或试剂发生某种明显的特征性反应；从而达到区分不同的微牛物。%1厌氧培养基：利用物理、化学或生物学方法，去除氧气示的培养基；可用于厌氧性细菌的分离和培养。4.细菌在培养基上的生长情况（1）固体培养基

5、单个细菌在培养基表血牛•长、繁殖到-•定程度时形成的肉眼可见的子细胞群落称为菌落，它是由数以万计相同的细菌集合冋成。众多细菌在固体培养基表而密集生长所形成的细胞群体称为菌苔。%1菌落的形态特征大小、形状（露滴状、圆形、菜花样、不规则等）、突起或扁平、凹陷、边缘（光滑、波形、锯齿状、卷发状等）、颜色（红色、灰白色、黑色、绿色、无色、黄色等）、表面（光滑、粗糙等）、透明度（不透明、半透明、透明等）和粘度等。据细菌菌落表面特征不同，可将菌落分为3型：光滑型菌落（S型菌落）：菌落表而光滑、湿润、边缘整齐，新分离的细菌人多呈光滑型菌落。粗糙型菌落（R型菌落）：菌落表面粗糙、干燥、呈皱纹或颗粒状，边缘人

6、多不幣齐。R型菌落多为S型细菌变界失去菌体表血多糖或蛋白质形成。R型细菌抗原不完整，毒力和抗吞噬能力都比S型细菌弱。但也有少数细菌新分离的毒力株就是R型，如炭疽泡杆菌、结核分枝菌等。粘液型菌落（M型菌落）：菌落粘稠、有光泽、似水珠样。多见丁•厚荚膜或丰富粘液层的细菌、结核杆菌等。%1菌落溶血特征a溶血：又称草绿色溶血，菌落周围培养基出现广2mm的草绿色环，为高铁血红蛋白所致；B溶血：乂称完全溶血，菌落周围形成一个完全清晰透明的溶血坏，是细菌产牛的溶血索使红细胞完全溶解所致；Y溶血：即不溶血，菌落周围的培养基没启变化，红细胞没有溶解或缺损。%1色索冇些细菌产生水溶性色素，使菌落和周围的培养基出

7、现绿色、金黄色、白色、橙色、柠檬色等颜色，产生的色素有水溶性或脂溶性。%1气味某些细菌在培养基屮牛长繁殖后可产住特殊气味，如铜绿假单胞菌（牛姜气味）、变形杆菌（巧克力烧焦的臭味）、厌氧梭菌（腐败的恶臭味）、白色假丝酵母菌（酵母味）和放线菌（泥土味）等。（2）液体培养基细菌在液体培养基中有3种牛长现象：大多数细菌在液体培养基牛长繁殖后呈均匀混浊；少数链状排列的细菌如链球菌、炭疽芽胞杆菌等则呈沉淀生长；枯草芽胞杆