急性白血病免疫分型ppt课件

《急性白血病免疫分型ppt课件》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在教育资源-天天文库。

1、急性白血病免疫分型简介白血病免疫分型是利用单克隆抗体（McAb）对骨髓或外周血中的白血病细胞进行免疫标记，检测其细胞膜及细胞浆抗原，分析其表型，以了解被测白血病细胞所属细胞系列及其分化程度，从而诊断白血病的类型。原理造血细胞分化抗原：造血细胞分化过程中由细胞核内染色体上的基因编码的镶嵌蛋白,存在于细胞表面和（或）细胞浆内，随着分化成熟过程不断发生改变。原理造血细胞分化抗原出现、增多、减少或消失与造血细胞所属系列和分化程度密切相关，因而可作为鉴别和区分造血细胞的标记。原理急性白血病细胞来自造血干/祖细胞的恶性克隆性增生，既保持造血细胞的部

2、分性质，又有其独特的生物学和免疫学特性：（1）急性白血病主要表现在骨髓或外周血中原始幼稚细胞显著增多，正常细胞成分受抑制，因此免疫分型表现在带有某种抗原标志的细胞比例异常增多或减少，例如T-ALL时的CD7+细胞远远超过正常人的30%，而CD13+/CD33+细胞的比例降低，并可能同时伴有CD34+、TdT+细胞的异常增多；（2）错位表达：即同一细胞出现异系列抗原混合表达，如AML细胞出现CD7、CD10抗原，ALL细胞出现CD33、CD14等；（3）抗原非同步化表达：如CD34与分化成熟较晚期的抗原不应该同步表达，但白血病细胞有时会出

3、现CD34/CD56、CD34/CD20等同时表达的异常现象；（4）抗原丢失：如CD13、CD33是髓系最常见抗原，但少数AML却不表达或仅表达其中一项。原理如何进行免疫分型选择良好的设门方法：FSC/SSC设门法,CD45／SSC设门法；目的：排除正常细胞的干扰，将不正常的细胞群孤立出来便于重点分析。CD45是所有白细胞的抗原，其表达量与细胞分化程度具有高度相关性，即细胞分化程度高的细胞，CD45表达量高；分化程度低的细胞，CD45表达量低。CD45表达量在成熟淋巴细胞最高，单核细胞、粒细胞、早期造血细胞依次减弱。红细胞(中、晚幼红细

4、胞、成熟红细胞)不表达CD45。侧向角光散射(SSC)反映细胞的颗粒性，成熟粒细胞SSC最高，依次为单核细胞、淋巴细胞、早期造血细胞、红细胞。通过CD45／SSC散点图即可获得初步印象。若同时加上一个或二个以上其它单抗进行二、三色甚至四色分析，则很容易识别非正常细胞群的表型。通常在CD45/SSC散点图上,白血病细胞群体多出现于由淋巴细胞、单核细胞、粒细胞和红细胞围成的称为“白血病窗”的区域内。根据骨髓细胞CD45/SSC图中分布情况设门圈定各类细胞R1门为成熟淋巴细胞R2门为正常单核细胞位置R3门正常粒细胞位置R4门为幼稚淋巴细胞出现

5、位置R5门为有核红细胞或细胞碎片位置R6门为幼稚髓细胞出现位置白血病细胞通常会在R4R6两门位置处出现正常骨髓经CD45/SSC射门的散点图CD45/SSC图中可见CD45强阳性SSC低信号的细胞群为淋巴细胞褐色细胞群体中等强度的CD45表达SSC信号最强的细胞群体为粒细胞蓝色及红色细胞群体CD45表达与SSC信号介于淋巴细胞与粒细胞之间的是单核细胞群体绿色细胞群体CD45阴性SSC信号最低的有核红细胞和细胞碎片单克隆抗体的选择白血病免疫分型时尽量选用系列特异性强的单抗作为一线单抗，目前较为公认系列特异性单抗有T系的CD3、CD2；B系

6、的CD79a、CD22、CD19和髓系的MPO、CD117、CD13等。一般说来胞浆比胞膜的标志特异性强。用这些特异性强的标志作为初筛，基本可确定T系、B系或髓系，随后即以二线单抗（CD14,CD36,CD41,CD34,CyIg,SmIg等）做进一步的免疫分型，以确定最后亚型。各系列造血细胞表达的主要相关抗原：T淋巴细胞系：CD1、CD2、CD3、CD4、CD5、CD7、CD8；B淋巴细胞系：CD10、CD19、CD20、CD22、CD23、CD24、CD79；粒、单核细胞系：CD11b/c，CD13，CD14，CD15，CD33、C

7、D64、CD65w、CD117及MPO；巨核细胞系：CD41、CD42、CD61、CD62、CD36；红细胞系：CD71、CD36、血型糖蛋白A（Glycophorin）；其它：造血干祖细胞共同抗原CD34、CD38及末端脱氧核糖核苷酸转换酶（TdT），人类主要组织相容性抗原HLA-DR，白细胞共同抗原CD45等。CD45/SSC设门中白血病细胞群表面标志阳性判断标准：阳性率>阴性对照的20％，对于MPO只需要>3％即可。ANLL的免疫分型急性非淋巴细胞性白血病（ANLL）的分型主要依靠形态学（包括细胞化学染色）来区分，尤其是FAB分型

8、中的M1、M2与M4、M5之间尚无明确的免疫标志划分，但对一些形态学难于分类或特殊类型的ANLL（如M0、M6、M7），细胞免疫学分析对临床确诊ANLL可提供重要信息。ANLL的免疫分型CD34是造血干细胞