砖火丝菌对电离辐射抗力测定方法的研究模板

《砖火丝菌对电离辐射抗力测定方法的研究模板》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在行业资料-天天文库。

资料内容仅供您学习参考，如有不当或者侵权，请联系改正或者删除。砖火丝菌对电离辐射抗力测定方法的研究闫傲霜　王爱连　　提要　研究了测定砖火丝菌对电离辐射抗力的方法,并对用美国卫生工业制造者协会”筛选程序”分离自棉制医用敷料的2株砖火丝菌进行了测定。结果表明,对琼脂平板上砖火丝菌培养物,采用沙洗法(以140目细沙代替常规法中的玻璃珠)洗脱,效果较好。对悬液中及干燥于纱布和琼脂片表面火丝菌,经剂量率为10～20kGy/h的60钴γ射线辐照,用剂量-存活曲线法和部分阳性测定法测得γ射线对火丝　菌D10值在2.0～3.0kGy之间。其中,部分阳性测定法测得D10值较高,干燥于纱布表面砖火丝菌抗力较弱。　　关键词　电离辐射灭菌　　砖火丝菌　　D10值　　检测方法STUDYONMETHODFORMEASURINGRADIORESISTANCEOFPyronemadomesticumYanAoshuang　　　WangAilian(BeijingRadiationApplicationResearchCenter,Beijing100012)Abstract

1资料内容仅供您学习参考，如有不当或者侵权，请联系改正或者删除。ThemethodformeasuringresistanceofPyronemadomesticumtoionizingradiationwasstudiedand2strainsofP.domesticumisolatedfromcotton-basedmedicaldressingbymeansof”ScreeningProcedures”ofAmericanAssociationofSanitaryIndustrialManufacturersweremeasured.TheresultsindicatedthatforcultureofP.domesticumonagarplate,elutionbysandwashingmethod(140-meshfinesandwasusedtoreplaceglassbeadsinconventionalmethod)hadgoodefficacy.D10valueofP.domesticuminsuspensionanddriedongauzeandsurfaceofagarpieceafter60Coγ-irradiationatadoserateof10-20kGy/hwasmeasuredtobebetween2.0-3.0kGybyusingdose-survivalcurvemethodandfractionpositivemethod.Ofthetwomethods,theD10valuemeasuedbyfractionpositivemethodwashigherandtheresistanceofP.domesticumdriedonsurfaceofgauzewasrelativelylow.　　Keywords　ionizingradiationsterilization　　Pyronemadomesticum　　D10value　　measuringmethod　　砖火丝菌(Pyronemadomesticum)是存在于棉制品上对环氧乙烷抗力较强的一种霉菌。棉制医疗用品曾因此而灭菌不彻底［1］。为了解其对电离辐射的抗力,供进行灭菌时参考,并鉴于尚无统一的砖火丝菌抗力测定方法,我们用不同方法洗脱其培养物及染在不同载体上,测定其对电离辐射的抗力。

2资料内容仅供您学习参考，如有不当或者侵权，请联系改正或者删除。1方法1.1菌悬液的制备　　将采用美国卫生工业制造者协会”筛选程序”,分离自棉纱布并保存在土豆胰蛋白琼脂(PDA)上的砖火丝菌N1和N2　株［2］,分别转种胰蛋白大豆肉汤(TSB)中,于20～25℃培养3d。取培养液1.0ml接种PDA平板(pH7.0),于20～25℃培养10d。然后,每个平板用1g140目的细沙和10ml无菌盐水,将其上的培养物洗脱(称为沙洗法),制成菌悬液。该悬液经旋涡混合器高速振荡1～2min,再用平板计数法和最可能数计数法(MPN)检测其菌含量。　　1.2染菌样片的制备　　1.2.1纱布菌片　　将脱脂纱布剪为5cm×5cm小片。灭菌后,1片纱布装于1支无菌试管中,向1片纱布上加0.1ml菌悬液。1片含菌纱布连同试管作为一个样品。室温下置超净工作台中过夜使干燥。从菌悬液接种纱布到辐照后加液体培养基,在24h内完成。　　1.2.2琼脂菌片　　将试验菌TSB培养物转种多个PDA平板,于20～25℃培养14d

3资料内容仅供您学习参考，如有不当或者侵权，请联系改正或者删除。。再将平板置于培养箱中靠近风扇的位置培养并使琼脂干燥成薄片状。用打孔器从琼脂薄片上打出直径6mm的圆片。将每个菌片放在1支灭菌试管中作为一个样品。　　1.3抗力测定　　1.3.1剂量-存活曲线测定法　　取6支无菌试管,各加1.0ml试验菌悬液。然后,1支不经照射作为对照,其余5支分别经以下剂量辐照:3、6、9、12、15kGy。辐照后,分别进行活菌计数。据计数结果,画出剂量-存活曲线并得出回归曲线方程,从方程求出D10值。　　1.3.2部分阳性测定法　　对分装于试管中的0.1ml菌悬液、纱布菌片和琼脂菌片,用7到9个递增剂量辐照。各样品在每个剂量组的数量,装菌悬液、纱布菌片、琼脂菌片的试管分别为4支、10支与10支。辐照后,立即在每个试管中加入3.0mlTSB。于20～25℃培养14d,观察结果。由下式计算D10值:　　D10=Dt/(lgN0-lgNt)　　　式中,Dt为出现阳性的最大辐照剂量;N0为每种样品初始菌数;Nt为每种样品最大剂量阳性组平均菌数,能够用ln(n/rt)计算,n为每个剂量组样品数量,rt为最大剂量阳性组的阴性试管数。

4资料内容仅供您学习参考，如有不当或者侵权，请联系改正或者删除。2结果　　2.1平板培养物洗脱方法比较　　对试验菌与短小芽胞杆菌的琼脂平板培养物,均用沙洗法及常规法(以玻璃珠代替细沙)洗脱,作计数比较。结果,两法的短小芽胞杆菌计数无明显区别,昆而砖火丝菌差别明显(表1)。　表1不同洗脱方法的菌落计数结果Table1Resultsofcolonycountingwithdifferentelutingmethods微生物Micro-organism平均菌数Averagebacterialcount(cfu／ml)常规法Conventionalmethod沙洗法Sandwashingmethod短小芽胞杆菌Bacilluspumilus砖火丝菌Pyronemadomesticum6800003500000(3400000)注:短小芽胞杆菌为平板计数,砖火丝菌为最可能数计数(括号中为平板计数)。结果为3次试验平均值。　Note:ThecountofBacilluspumilusisplatecountandthatofP.domesticumisthemostpossiblecount(thefigureinbracketsisplatecount).Theresultsaremeansoftestfor3times.

5资料内容仅供您学习参考，如有不当或者侵权，请联系改正或者删除。　　2.2砖火丝菌悬液对γ射线的抗力　　经60钴γ射线照射(重铬酸钾剂量计测剂量率为10～20kGy/h),由剂量-存活曲线法测得2株砖火丝菌的存活曲线(图1,图2),从该回归曲线方程得出其D10值均略低于由部分阳性测定法测得者(表2)。表2　2株砖火丝菌悬液的D10值Table2D10valuesof2strainsofP.domesticuminsuspension菌株StrainD10值(kGy)D10value剂量存活曲线法Dose-survivalcurvemethod部分阳性测定法FractionpositivemethodN12.22.7N22.63.02.3不同载体砖火丝菌的抗力　　部分阳性测定法结果表明,干燥于纱布表面砖火丝菌N1株,对γ射线的抗力较干燥于琼脂片表面者略小(表3)。杀灭纱布与琼脂片表面砖火丝菌N1株的D10值分别为2.0kGy与2.7kGy。干燥于琼脂片表面砖火丝菌抗力与悬液者相同。

6资料内容仅供您学习参考，如有不当或者侵权，请联系改正或者删除。图1砖火丝菌N1的剂量存活曲线Fig1Dose-survivalcurveofstrainN1ofP.domesticum图2砖火丝菌N2的剂量存活曲线Fig2Dose-survivalcurveofstrainN2ofP.domesticum3讨论　　试验表明,在制备砖火丝菌悬液时,采用沙洗法将琼脂平板上培养物洗脱,

7资料内容仅供您学习参考，如有不当或者侵权，请联系改正或者删除。对有菌丝大量生长的本菌效果较好。但如果要对砖火丝菌孢子作进一步纯化尚有一定困难.结果表明,用部分阳性测定法测得砖火丝菌抗力高于用剂量存活曲线法者;干燥于琼脂片表面砖火丝菌抗力与悬液者相同,比干燥于纱布表面者强。此结果表明,对砖火丝菌用琼脂菌片及部分阳性测定法测其对γ射线抗力较合适。　　测出60钴辐照对砖火丝菌D10值远大于常见霉菌的D10值,而与典型的抗辐射孢子的D10值范围相同。此说明所制砖火丝菌悬液与琼脂菌片上含有较多数量的该菌子核孢子。但为进一步确认按ISO辐射灭菌剂量设定方法设定的剂量是否适用于砖火丝菌,并为染有此菌的医疗用品给出一个合适的剂量,应对典型制品上染砖火丝菌的辐射抗力进行测定,特别是研究砖火丝菌出现频率以及这个频率变化对剂量验证实验及灭菌最终结果的影响,从而制定解决此类问题的通用灭菌工艺。表3不同载体砖火丝菌N1株对γ射线的抗力Table3ResistanceofstrainN1ofP.domesticumondifferentcarrierstoγ-rays载体Carrier辐照剂量Radiationdose(kGy)r／n纱布片Gauzestrip1.000／10　1.996／10　3.988／10

8资料内容仅供您学习参考，如有不当或者侵权，请联系改正或者删除。　5.978／10　7.969／10　9.9410／10　11.9210／10　13.9110／10　15.9010／10琼脂片Agarpiece0.960／10　1.922／10　2.885／10　3.849／10　4.808／10　5.769／10　6.7310／10　7.688／10　8.6410／10注:n与r分别为每个剂量组样品数量与阴性样品数量。　　　Note:nandrareNo.ofsamplesandNo.ofnegativesamplesrespectivelyineachdosegroup.　　对北京市科委科技新星计划和北京市跨世纪人才计划给予第一作者及本项目的支持表示感谢。闫傲霜(北京市射线应用研究中心,北京　100012)王爱连(北京市射线应用研究中心,北京　100012)参考文献

9资料内容仅供您学习参考，如有不当或者侵权，请联系改正或者删除。［1］BryansT,AaronsonJ.Industry'sStrugglewithPyronema.MedDevDiagInd,1994;16(10):102.［2］YanA.ContaminationSourcesofPyronemadomesticumonChineseCotton-basedMedicalProducts.RadiatPhysChem,1998;52(1～6):7.