保健食品中金雀异黄素的测定

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保健食品中金雀异黄素的测定Determinationofgenisteininhealthfood1.范围本方法规定了用高效液相色谱法测定保健食品和普通食品中金雀异黄素的含量。本方法适用于保健食品和普通食品中金雀异黄素的测定。最低检出限量为：0.1mg；本方法最佳线性范围：1.00～125mg/mL。2.方法提要试样经乙醚脱脂，弃取乙醚后用甲醇水（80+20，v/v）超声提取30分钟，过0.45mm滤膜、定容后进行液相色谱分析。试样中的金雀异黄素用C18柱分离，二极管阵列检测器或紫外检测器（260nm）测定，峰面积定量，外标法计算结果。

12.试剂本标准所用试剂未经指定者，均为分析纯（A.R），水为石英亚沸蒸馏水。3.1甲醇（色谱纯）3.2无水乙醚3.3甲醇+水（80+20）3.4金雀异黄素(Genistein)标准品3.50.050mol/L醋酸铵，pH4.6：准确称取3.85g醋酸铵于小烧杯中，适量水溶解，转移至1000mL容量瓶中，加水500mL，加入3.00mL冰醋酸，摇匀，加水至容量瓶刻度，摇匀即可。4.仪器4.1高效液相色谱仪（二极管阵列检测器或紫外检测器）。20.0mL定量管4.2超声波清洗器

24.3离心机4000r/min5.分析步骤5.1高效液相色谱参考条件5.1.1色谱柱:不锈钢柱，内径4.6mm,长250mmC18柱，填料粒径10mm。5.1.2流动相：甲醇+0.05mol/L乙酸铵,pH4.6（46+54，v/v）5.1.3流量：1.2mL/min。5.1.4进样量：20.0mL5.2试样制备5.2.1保健食品：准确称取1g试样，加50mL甲醇水（3.3）超声提取30min，上清液抽滤，残渣用（3.3）甲醇水洗，洗液一并抽滤，定容至100.0mL，过0.45mm滤膜，测定。5.2.2豆奶粉类食品：准确称取磨碎的豆粉或奶粉类试样5-10g，用60mL-100mL

3乙醚分三次脱脂，弃取乙醚层，加50mL甲醇水（3.3）超声提取30min，上清液抽滤，残渣用（3.3）甲醇水洗，洗涤液一并抽滤，定容后过0.45m滤膜，测定。5.2.3各种豆腐：准确称取试样10g，用玻棒搅匀后用60mL乙醚分三次脱脂，加50mL甲醇水（3.3）超声提取30min，过滤，测量体积后过0.45mm滤膜，测定。5.2.4豆腐丝、豆腐干：准确称取试样10g，加无水硫酸钠研磨，转入具塞三角瓶中，加50mL甲醇水（3.3）超声提取30min，过滤，定容后过0.45mm滤膜，测定。5.2.5金雀异黄素储备液：精密称取金雀异黄素标准品10.00mg，用甲醇溶解并定容至10.00mL。此液为1.000mg/mL。5.2.6金雀异黄素应用液：分别取金雀异黄素储备液0.0100、0.0500、0.100、0.300、0.500、1.25mL，用甲醇定容至10.0mL（浓度各为1.00、5.00、10.0、30.0、50.0、125mg/mL）。在上述色谱条件下注入标准溶液和试样溶液，以保留时间定性，峰面积定量，外标法计算。6.分析结果的表述

46.1计算A´Ci´V×KX=Ai´m式中：X：试样中金雀异黄素的含量mg/kgA：试样的峰面积或峰高Ci：金雀异黄素标准溶液的浓度,µg/mLAi：标准溶液的峰面积或峰高ｍ：试样质量,gV：试样定容体积，mLK:稀释因子6.2结果表示：报告算术平均值的两位有效数。

57.允许差同一实验室，同时测定或重复测定结果的相对偏差不得超过10%。8.准确度将试样中加入不同浓度的金雀异黄素，做回收率实验，回收率应在85%~110%范围内。9.其它1.使用二极管阵列检测器波长设定范围210-400nm;2.可以建立金雀异黄素标准的吸收光谱谱库，测定试样时试样吸收光谱与标准的吸收光谱进行比较，可以克服单靠保留时间定性的不足，增加定性的准确性；3.根据色谱峰的峰纯度可以判定是否有干扰物质存在。4.在标准储备液可同时加入黄豆苷(Daidzin),染料木苷(Genistin),黄豆苷原(Daidzein)标准品，黄豆苷,染料木苷,黄豆苷原不干扰金雀异黄素的测定。