海洋生物化学实验教学大纲

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1、海洋生物化学实验教学大纲一、制定本大纲的依据根据2006级海洋科学专业培养计划及2006级海洋科学教学计划和《海洋生物化学》课程教学大纲对学生实验能力培养要求而制定本实验大纲。二、本实验课程的具体安排实验项目的设置及学时分配序号实验项目名称内容简介（50字左右）实验学时实验要求实验类型实验类别每组人数1蛋白质含量的测定学习掌握考马斯亮蓝G-250法测定蛋白质含量的原理和方法2必修验证基础22海藻DNA的提取学习从新鲜的海藻中提取总DNA的方法4必修验证基础23淀粉酶活性的测定植物中的淀粉酶能将贮藏的

2、淀粉水解成麦芽糖。淀粉酶几乎存在于所有植物中，其中以禾谷类种子的淀粉酶活性最强。植物中有a-淀粉酶及β-淀粉酶，其活性因植物的生长发育时期不同而有所变化。本实验的目的在于掌握分别测定这两种淀粉酶的方法。6必修综合基础2三、本实验课在该课程体系中的地位与作用本实验课程是为海洋科学专业本科高年级学生开设的一门设计及研究性实验课程，是海洋科学专业的一门专业基础课，主要涉及静态和动态两方面，即物质的结构性质和功能，与物质和能量的代谢。通过本课程的学习，使学生从分子水平上理解与环境治理相关的生物的结构、营养需

3、求、代谢和增殖，提高理论水平，为海洋生物技术的学习打下良好的基础。在实验过程中，通过对一些生物化学基本仪器的操作讲解及实验过程中学生们亲手操作，使学生对这些仪器的基本工作原理及操作能够基本掌握，通过实验教学，强化实验技能训练，使学生全面掌握生化仪器及实验技术，培养学生理论联系实际、实事求是的学风，提高分析问题、解决问题的能力，掌握基本的专业实验技术和操作技能，提高学生独立思考和创新能力。同时与毕业设计和后续的研究生教育接轨。四、学生应达到的实验能力与标准通过该实验课的开设使学生加深对海洋生物化学基本

4、原理的理解，掌握一些生物化学3基本仪器的操作使用方法，掌握海洋生物化学实验的基本技能，通过该实验课提高学生分析问题、解决问题的能力，培养学生实事求是的科学态度，培养学生严谨的科学作风和良好的实验素养。1、使学生了解并掌握在海洋生物化学研究中用到的一些仪器，通过具体的实验操作，使学生们能够理论联系实际，系统地掌握一些仪器的使用操作技能，2、使学生在实际工作中能够正确地选择和运用各种仪器来进行解决海洋生物化学研究过程中的难题，培养学生综合分析和解决问题的能力。3、培养学生从事与海洋生物化学技术相关科研与

5、生产的能力。五、讲授实验的基本理论与实验技术知识实验一蛋白质含量的测定基本内容：考马斯亮蓝G-250的磷酸溶液呈棕红色，当它与蛋白质通过疏水作用后变成蓝色，最大吸收波长从465nm转移到595nm处。考马斯亮蓝G-250--蛋白质复合物具有很高的消光系数，因此蛋白质测定的灵敏度较高，最低检出量为1ug蛋白质。考马斯亮蓝G-250与蛋白质的结合，大约只需2分钟，结合物的颜色在1小时内是稳定的。一定范围内,溶液在595nm波长下的吸光度与蛋白质含量成正比，可用比色法测定。一些阳离子，如K+，Na+，Mg

6、2+，（NH4）2SO4，乙醇等物质不干扰测定，但去污剂如Tritonx-100、SDS等严重干扰测定，少量的去污剂可通过用适当的对照消除。基本要求：通过本实验学习考马斯亮蓝G-250法测定蛋白质含量的原理，了解分光光度计的结构、原理和在比色法中的应用。基本仪器：723分光光度计、电子分析天平、试管1.5cm×15cm（×8）、吸管0.10mL(×1),0.5mL(×2)1.0mL(×2),2.0mL(×1),5.0mL(×1)、容量瓶1000mL、量筒10mL，100mL、洗耳球基本耗材：考马斯亮

7、蓝G-250、NaCl、牛血清白蛋白、乙醇、磷酸、擦镜纸、滤纸实验二海藻DNA的提取基本内容：以机械力破碎细胞壁，然后加入十六烷三甲基溴化铵分离缓冲液，使细胞膜破裂，同时将核酸与海藻多糖等杂质分开。基本要求：学习从新鲜的海藻中提取总DNA的方法。基本仪器：研钵、恒温水浴、离心机、紫外分光光度计基本耗材：CTAB。3实验三酶的基本性质基本内容：a-淀粉酶和β-淀粉酶，各有其一定的特性，如β-淀粉酶不耐热，在高温下易钝化，而a-淀粉酶不耐酸，在PH3.6以下则发生钝化。通常提取液中同时有两种淀粉酶存在，

8、测定时，可根据它们的特性分别加以处理，钝化其中之一，即可测出另一酶的活性。将提取液加热到70℃维持15分钟以钝化β-淀粉酶，便可测定a-淀粉酶的活性。或者将提取液用pH3.6之醋酸在0℃加以处理，钝化a-淀粉酶，以求出β-淀粉酶的活性。淀粉酶水解淀粉生成的麦芽糖，可用3，5—二硝基水杨酸试剂测定。由于麦芽糖能将后者还原生成3-氨基-5-硝基水杨酸的显色基团，在一定范围内其颜色的深浅与糖的浓度成正比，故可求出麦芽糖的含量。以麦芽糖的毫克数表示淀粉酶活性的大小。基本要求：