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《国家标准:gbt 28096-2011 木薯细菌性萎蔫病菌检疫鉴定方法》由会员上传分享,免费在线阅读,更多相关内容在行业资料-天天文库。
1、ICS65.020.01B16囝圄中华人民共和国国家标准GB/T28096--2011木薯细菌性萎蔫病菌检疫鉴定方法DetectionandidentificationofXanthomonasaxonopodispv.manihotis(Bondar)Vauterineta1.‘2011-12-30发布2012—06—01实施丰瞀鹳紫瓣警矬瞥鐾发布中国国家标准化管理委员会促19标准分享网www.bzfxw.com免费下载刖置GB/T28096--2011本标准按照GB/T1.1—2009给出的规则起草。本标准由全国植物检疫标准化技术委
2、员会(SAC/TC271)提出并归口。本标准起草单位:中华人民共和国海南出入境检验检疫局、中华人民共和国山东出入境检验检疫局、中华人民共和国江苏出入境检验检疫局。本标准主要起草人:李伟东、封立平、刘福秀、韩玉春、周先超、粟寒、吴翠萍、王英超。标准分享网www.bzfxw.com免费下载1范围木薯细菌性萎蔫病菌检疫鉴定方法GB/T28096--2011本标准规定了植物检疫中木薯细菌性萎蔫病菌的检疫鉴定方法。本标准适用于木薯种子、苗木、种茎和其他繁殖材料中木薯细菌性萎蔫病菌的检疫鉴定。2规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡
3、是注日期的引用文件,仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件,其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件。GB/T4789.28食品卫生微生物学检验染色法、培养基和试剂3木薯细菌性萎蔫病菌基本信息中文名:木薯细菌性萎蔫病菌(地毯草黄单胞杆菌木薯致病变种)。学名:Xanthomonasazonopodispv.manihotis(Bondar)VauterinJHoste,Kersters&Swings1995。异名:BacillusmanihotisArthaud—BerthetandBondar1912,Phytomonas
4、manihotis(BerthetandBondar)Viegas,Xanthomonasmanihotis(BerthetandBondar)Starr1946,Xanthomonas.campestrispv.manihotis(ArthaudandBondar)Dye1978。病害英文名:bacterialblightofcassava,cassavabacterialblight。属原核生物界Procaryotes、变形细菌门Proteobacteria、y-变形细菌纲Gammaproteobacteria、黄色单胞菌目Xant
5、homonadales、黄色单胞菌科Xanthomonadaceae、黄色单胞菌属Xanthomonas、地毯草黄单胞杆菌Xanthomonasaxonopodis。病菌的远距离传播主要靠带菌种子、苗木和种茎。绝大多数木薯病种子不表现任何症状,病菌以休眠状态存在于种子的胚部和种皮。木薯细菌性萎蔫病菌的其他信息参见附录A。4方法原理该病害症状、病菌生物学特性、生理生化特性、致病性测试和基因组DNA的特异性PCR检测是该病菌检测鉴定的依据。5仪器和用具5.1仪器电子天平、实体显微镜、超净工作台、温控培养箱、高压灭菌锅、微生物自动鉴定系统、P
6、CR仪、电泳仪、紫外检测仪或凝胶成像系统、离心机、恒温水浴锅(30℃~95℃)、超低温冰箱、普通冰箱、纯水机、涡旋振荡器、可调微量加样器。1标准分享网www.bzfxw.com免费下载GB/T28096--20115.2用具解剖刀、裁纸刀、量筒、烧杯、培养皿、三角瓶、离心管、放大镜、手术剪、镊子、接种环等。6化学试剂6.1试剂次氯酸钠(NaCiO)、磷酸二氢钠(NaH:PO。)、70%乙醇、吐温一60、吐温一80、淀粉、蔗糖、葡萄糖、果糖、海藻糖,PCR检测所需试剂(参见附录B)。6.2培养基CTA和LPG培养基及配制(见附录c)。7检
7、测鉴定7.1症状检查首先观察植株是否萎蔫,接着仔细检查植株的嫩芽、茎、叶等各个部位,嫩芽、叶是否出现凋萎;叶片是否出现水渍状,暗绿色多角形的小斑,褐色或深褐色由黄晕围绕的不规则形的病斑,凋萎,干枯脱落;嫩茎和叶柄是否有水渍状,黑褐色下陷的病斑;横切茎干,检查其维管束组织是否变褐坏死、病部受挤压后是否有菌脓溢出。7.2快速初筛对出现典型症状的植株直接进行病菌分离;对症状不典型或不明显的木薯种子、苗木和种茎应用PCR法进行快速初筛。从植物组织(种子或叶片或种茎)中抽提总核酸,用木薯细菌性萎蔫病菌标准菌株作阳性对照,用地毯草黄单胞杆菌其他致病
8、变种的标准菌株和健康植株抽提总核酸作阴性对照,用超纯水作为空白对照,进行PCR(方法步骤见附录C)检测分析。若PCR检测结果为阳性,继续进行7.3;若PCR检测结果为阴性,则可判定为未检出。7.3病菌分离7
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