GBT28100-2011-香石竹细菌性萎蔫病菌检疫鉴定方法.pdf

《GBT28100-2011-香石竹细菌性萎蔫病菌检疫鉴定方法.pdf》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在行业资料-天天文库。

1、ICS65．020．01B16囝雪中华人民共和国国家标准GB／T28100一2011香石竹细菌性萎蔫病菌检疫鉴定方法DetectionandidentificationofBurkholderiacaryophyili(Burkholder)Yabuuchieta1．。2011—12—30发布2012—06—01实施丰瞀鹃鬻瓣警矬瞥霎发布中国国家标准化管理委员会“”’标准分享网www.bzfxw.com免费下载刖吾GB／T28100一2011本标准按照GB／T1．12009给出的规则起草。本标准由全国植物检疫标准化技术委员会(sAC／Tc271)提出并归口。本标准

2、起草单位：中华人民共和国山东出入境检验检疫局、中华人民共和国辽宁出入境检验检疫局、中国检验检疫科学研究院。本标准主要起草人：邵秀玲、王有福、赵文军、甘琴华、厉艳、王英超、尼秀媚、粟智平、吴兴海、张治宇、余冬冬。标准分享网www.bzfxw.com免费下载1范围香石竹细菌性萎蔫病菌检疫鉴定方法GB／T28100—2011本标准规定了香石竹细菌性萎蔫病菌的检疫鉴定方法。本标准适用于石竹属、满天星等植物种苗及产品中香石竹细菌性萎蔫病菌的检疫鉴定。2规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件

3、，其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件。GB／T4789．28食品卫生微生物学检验染色法、培养基和试剂SN／T1157进出境植物苗木检疫规程3香石竹细菌性萎蔫病菌基本信息中文名：香石竹细菌性萎蔫病菌。．学名：Burkholderiacaryophylli(Burkholder1942)Yabuuchieta1．1993Pseudomonascaryophylli(Burkholder1942)Starr＆Burkholder1942中文俗名：麝香石竹伯克霍尔德氏菌、石竹伯克霍尔德氏菌、红掌细菌性叶疫病病害英文名：bacterialwiltofcarnatio

4、n．属原核生物界(Procaryotae)薄璧细菌门(Gracilicutes)暗细菌纲(Seotophobia)假单胞菌目(Pseudomonadales)假单胞菌科(Pseudomonadaeeae)伯克霍尔德氏菌属(Burkholderia)。通过感染病菌的切割部分进行短距离传播。香石竹细菌性萎蔫病菌基他信息参见附录A。4方法原理经现场查验，实验室用显微镜、定量PCR仪等仪器设备对样品进行检测，根据病原菌的菌落特征、菌体形态、生理生化特性及致病性测定和分子生物学检测结果进行判定。5仪器设备和用具5．1仪器设备电子天平(感量0．0001g)、植物生长培养箱、恒

5、温培养箱、恒温振荡培养箱、高压灭菌器、超净工作台、生物显微镜(具照相系统)、高速冷冻离心机(12000r／min)、小型离心机、纯水仪、恒温水浴锅、低温冰箱、PCR仪、电泳仪、电泳槽、凝胶成像分析仪、电动搅拌器、真空冷冻干燥机等。5．2用具培养皿、试管、可调式微量进样器(zpL、lOpL、20pL、100pL、200pL、l000pL)及其枪头、研钵、标准分享网www.bzfxw.com免费下载GB／T28100—2011离心管(1．5mL、1．0mL)、PCR管(o．2pL)、量筒、烧杯等。6试剂除另有规定外，所有试剂均为分析纯或生化试剂。培养、鉴定香石竹细菌性

6、萎蔫病菌所用培养基参见附录B。7检测鉴定7．1现场检疫7．1．1样品数量按sN／T1157的规定执行。7．1．2症状观察该菌侵染植株后，可在导管周围产生大量堵塞导管的赘生物，随之导致维管束变色，茎基部节间开裂溃疡，切开病茎可见有棕黄色软泥状菌液溢出；感染病菌的植物叶片和茎呈灰绿色，叶片逐渐变黄枯萎；严重者根茎部腐烂，直至植株枯萎死亡。症状显示后，植株一般会在1个～2个月内死亡，通过检查成熟植株地上部分呈现出灰绿色症状很容易进行判断。7．2实验室检测鉴定注：实验室检测鉴定流程图参见附录C。7．2．1样品初筛通过肉眼或显微镜观察，对危害症状不明显的潜在感染可直接通过分

7、子生物学检测进行样品初筛，初筛阳性的样品需完成7．2．2～7．2．6的检测。危害症状明显的样品需进行7．2．2～7．2．7的检测，30℃以上的培养条件可提高症状出现的速度。72．2病原菌的分离与培养取可疑植物组织，75％酒精消毒，无菌水洗3次后，放在无菌的载玻片上用无菌的玻璃棒研碎，滴一滴无菌水于研碎的病组织上。静置2min～5rain后，用稀释法或无菌的移植环蘸取以上组织液在培养基平板上划线，28℃培养24h～48h后，观察菌落生长情况。7．2．3菌落特征病原菌在523培养基上呈圆形凸起，边缘整齐，透明，表面发亮，生长快，培养48h菌落直径2ram左右(参见附录

8、D)；在N