国家标准：gbt 28100-2011 香石竹细菌性萎蔫病菌检疫鉴定方法

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1、ICS65．020．01B16囝雪中华人民共和国国家标准GB／T28100一2011香石竹细菌性萎蔫病菌检疫鉴定方法DetectionandidentificationofBurkholderiacaryophyili(Burkholder)Yabuuchieta1．。2011—12—30发布2012—06—01实施丰瞀鹃鬻瓣警矬瞥霎发布中国国家标准化管理委员会“”’标准分享网www.bzfxw.com免费下载刖吾GB／T28100一2011本标准按照GB／T1．12009给出的规则起草。本标准由全国植物检疫标准化技术委员会(s

2、AC／Tc271)提出并归口。本标准起草单位：中华人民共和国山东出入境检验检疫局、中华人民共和国辽宁出入境检验检疫局、中国检验检疫科学研究院。本标准主要起草人：邵秀玲、王有福、赵文军、甘琴华、厉艳、王英超、尼秀媚、粟智平、吴兴海、张治宇、余冬冬。标准分享网www.bzfxw.com免费下载1范围香石竹细菌性萎蔫病菌检疫鉴定方法GB／T28100—2011本标准规定了香石竹细菌性萎蔫病菌的检疫鉴定方法。本标准适用于石竹属、满天星等植物种苗及产品中香石竹细菌性萎蔫病菌的检疫鉴定。2规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。

3、凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件。GB／T4789．28食品卫生微生物学检验染色法、培养基和试剂SN／T1157进出境植物苗木检疫规程3香石竹细菌性萎蔫病菌基本信息中文名：香石竹细菌性萎蔫病菌。．学名：Burkholderiacaryophylli(Burkholder1942)Yabuuchieta1．1993Pseudomonascaryophylli(Burkholder1942)Starr＆Burkholder1942中文俗名：麝香石竹伯

4、克霍尔德氏菌、石竹伯克霍尔德氏菌、红掌细菌性叶疫病病害英文名：bacterialwiltofcarnation．属原核生物界(Procaryotae)薄璧细菌门(Gracilicutes)暗细菌纲(Seotophobia)假单胞菌目(Pseudomonadales)假单胞菌科(Pseudomonadaeeae)伯克霍尔德氏菌属(Burkholderia)。通过感染病菌的切割部分进行短距离传播。香石竹细菌性萎蔫病菌基他信息参见附录A。4方法原理经现场查验，实验室用显微镜、定量PCR仪等仪器设备对样品进行检测，根据病原菌的菌落特征、

5、菌体形态、生理生化特性及致病性测定和分子生物学检测结果进行判定。5仪器设备和用具5．1仪器设备电子天平(感量0．0001g)、植物生长培养箱、恒温培养箱、恒温振荡培养箱、高压灭菌器、超净工作台、生物显微镜(具照相系统)、高速冷冻离心机(12000r／min)、小型离心机、纯水仪、恒温水浴锅、低温冰箱、PCR仪、电泳仪、电泳槽、凝胶成像分析仪、电动搅拌器、真空冷冻干燥机等。5．2用具培养皿、试管、可调式微量进样器(zpL、lOpL、20pL、100pL、200pL、l000pL)及其枪头、研钵、标准分享网www.bzfxw.com

6、免费下载GB／T28100—2011离心管(1．5mL、1．0mL)、PCR管(o．2pL)、量筒、烧杯等。6试剂除另有规定外，所有试剂均为分析纯或生化试剂。培养、鉴定香石竹细菌性萎蔫病菌所用培养基参见附录B。7检测鉴定7．1现场检疫7．1．1样品数量按sN／T1157的规定执行。7．1．2症状观察该菌侵染植株后，可在导管周围产生大量堵塞导管的赘生物，随之导致维管束变色，茎基部节间开裂溃疡，切开病茎可见有棕黄色软泥状菌液溢出；感染病菌的植物叶片和茎呈灰绿色，叶片逐渐变黄枯萎；严重者根茎部腐烂，直至植株枯萎死亡。症状显示后，植株一

7、般会在1个～2个月内死亡，通过检查成熟植株地上部分呈现出灰绿色症状很容易进行判断。7．2实验室检测鉴定注：实验室检测鉴定流程图参见附录C。7．2．1样品初筛通过肉眼或显微镜观察，对危害症状不明显的潜在感染可直接通过分子生物学检测进行样品初筛，初筛阳性的样品需完成7．2．2～7．2．6的检测。危害症状明显的样品需进行7．2．2～7．2．7的检测，30℃以上的培养条件可提高症状出现的速度。72．2病原菌的分离与培养取可疑植物组织，75％酒精消毒，无菌水洗3次后，放在无菌的载玻片上用无菌的玻璃棒研碎，滴一滴无菌水于研碎的病组织上。静置

8、2min～5rain后，用稀释法或无菌的移植环蘸取以上组织液在培养基平板上划线，28℃培养24h～48h后，观察菌落生长情况。7．2．3菌落特征病原菌在523培养基上呈圆形凸起，边缘整齐，透明，表面发亮，生长快，培养48h菌落直径2ram左右(参见附录D)；在N