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基础研究与临床医学与哲学(临床决策论坛版)2009年5月第30卷第5期总第381期二甲双胍对糖尿病大鼠脂联素的影响①②3①①张雪扬贾玉杰杜建玲王咏波摘要:二甲双胍能够改善胰岛素抵抗,而脂联素与胰岛素抵抗密切相关,因此本研究通过建立糖尿病大鼠模型,并给予二甲双胍治疗,观察胰岛素抵抗和脂联素的变化,研究结果显示二甲双胍的治疗改善胰岛素抵抗的同时,也增加了血清和组织中脂联素的表达,提示二甲双胍改善胰岛素抵抗的机制之一可能是通过增加脂联素的表达而获益。关键词:糖尿病,二甲双胍,胰岛素抵抗,脂联素中图分类号:R587文献标识码:A文章编号:1002-0772(2008)5-0058-03EffectsofMetforminonAdiponectininDiabetesRatsZHANGXue2yang,JIAYu2jie,DUJian2ling,etal.ThefirstAffiliatedHospitalofDalianMedicalUniversity,Dalian116011,ChinaAbstract:Metformincouldimproveinsulinresistancewhichisrelatedtoadiponectin.Animalmodelofdiabetesmellituswasestablished.Andtheanimalsweretreatedwithmetformintoinvestigatethechangesofinsulinresistanceandadiponectin.Theresultsshowedthatmetforminamelioratedinsulinresistanceandincreasedadiponectinexpressioninplasmaandtis2sue.Sooneofmechanismofmetforminimprovinginsulinresistancemightbethatmetformincouldincreaseadiponectinex2pression.KeyWords:diabetesmellitus,metformin,insulinresistance,adiponectin脂联素是脂肪细胞特异分泌的细胞因子,能增加胰岛素敏1.2血清指标的检测感性,具有拮抗胰岛素效应,被认为是脂肪组织所表达和分泌的采用葡萄糖氧化酶法测定空腹血糖(FBG)及酶法测甘油三多种产物中与胰岛素抵抗(IR)关系最紧密的一个特异性细胞因酯(TG)和总胆固醇(TC)由大生化室统一完成;用放免法测定血子,人类血脂联素浓度与IR程度成反比,有人提出把它作为预清胰岛素(FINS)、肿瘤坏死因子(TNF)-α(北京北方生物研究[1]所)、脂联素(美国Linco公司)。胰岛素抵抗程度判断使用HO2测2型糖尿病(T2DM)的一个指标。二甲双胍是治疗T2DM的药物,可以改善IR,但有关二甲双胍对脂联素作用的研究报道MA胰岛素抵抗指数(HOMA-IR),HOMA-IR=FBG×[4]尚少。为此,本实验观察二甲双胍对脂联素影响,探讨二甲双胍FINS/22.5。改善IR的机制。1.3合成相关引物1材料与方法从有关资料获得所需引物,在基因库中进行核对,并由大连1.1动物模型的建立与分组Takara公司合成引物。引物序列详见表1。表1SD大鼠PCR引物序列健康雄性SD大鼠30只(由大连医科大学实验动物中心提供),基础饲料(总热能14kJ·g-1:蛋白20%,脂肪8%,碳水化检测指标引物序列扩增片断和物50%)适应性喂养1周后,体重达200～250g。随机取24只脂联素上游:5’–AATCCTGCCCAGTCATGAAG–3’108bp-1下游:5’–TCTCCAGGAGTGCCATCTCT–3’按25mg·kg体重的剂量尾静脉注射链脲佐菌素(STZ,Sigma-1公司产品,溶于0.1mol·L柠檬酸缓冲液,PH4.4);余下6只TNF-α上游:5’–CACCATGAGCACGGAAAGCA–3’705bp大鼠尾静脉注射相应剂量的柠檬酸缓冲液作为正常对照下游:5’–GCAATGACTCCAAAGTAGACC–3’(NC)[2]。2周后挑选糖耐量异常者(糖耐量曲线下面积大于NCβ-actin上游:5’–TAAAGACCTCTATGCCAACAC–3’357bp组均数2倍标准差)给予高热量饲料(基础饲料加蔗糖、奶粉、鸡下游:5’–TAAAGCCATGCCAAATGTCTC–3’-1蛋、炼猪油等混合形成,总热量20kJ·g:蛋白15%,脂肪1.4RT-PCR25%,糖51%)喂养8周,正常对照组(NC)仍给予基础饲料,并Trizol试剂为美国Invitrogen产品;RT-PCR试剂盒购于监测体重、饮水和饮食量。8周后,以两次随机血糖≥16.7大连Takara公司。按常规步骤操作分别逆转录cDNA、PCR扩-1mmol·L者为糖尿病大鼠,共18只大鼠造模成功。模型组随增、电泳、凝胶成像,UVP-GDS8000凝胶成像分析系统扫描图机分为3组:糖尿病对照组(DM组)、二甲双胍低剂量组(Met-像并测定电泳条带的灰度,以目的基因(脂联素、TNF-α)与内-1-1)H,100mg·kg·d、二甲双胍高剂量组(Met-L,156mg·参(β-actin)电泳条带灰度值的比值作数据分析。PCR反应条-1-1),kg·d每日定时进行灌胃。NC组和DM组给予相应生理件详见表2。-1盐水。4周后,禁食过夜12小时,2%戊巴比妥钠1ml·kg腹1.5统计学分析腔注射麻醉,腹主动脉取血、肾周脂肪组织备用。实验中所用二采用Spss12.0统计软件进行统计学处理,实验数据采用均甲双胍(商品名:格华止)由施贵宝公司提供。数±标准差(x±s)表示,多样本均数比较用单因素方差分析(one-wayANOVA),各组间的两两比较用最小显著差法(the①大连医科大学附属第一医院内分泌科辽宁大连116011leastsignificantdifference,LSD)分析,相关性分析采用Pearson②大连医科大学辽宁大连116044相关分析,P<0.05为差异有统计学意义。58MedicineandPhilosophy(ClinicalDecisionMakingForumEdition),May2009,Vol.30,No.5,TotalNo.381©1994-2009ChinaAcademicJournalElectronicPublishingHouse.Allrightsreserved.http://www.cnki.net 二甲双胍对糖尿病大鼠脂联素的影响———张雪扬等医学与哲学(临床决策论坛版)2009年5月第30卷第5期总第381期表2RT-PCR反应条件比,体重下降,差异具有统计学意义(P<0.05)。见表3。目的基因反应条件DM组大鼠血FBG、TC、TG均明显高于NC组(P<0.0594℃3.5min,(94℃45s,55℃45s,72℃45s)×32个循或P<0.01),分别较正常对照组增加了79.90%,29.84%,脂联素环,72℃7min57.98%,但是FINS与NC组相比没有明显变化。给予二甲双94℃3.5min,(94℃45s,55℃45s,72℃45s)×32个循TNF-α胍治疗,降低血糖(P<0.05)的同时,血脂水平也明显降低(P<环,72℃7min0.05),而且随着剂量的增加,血糖血脂下降幅度更大,而FINS94℃3.5min,(94℃45s,56℃45s,72℃45s)×30个循β-actin始终没有明显变化。见表3。环,72℃7.5minDM组、Met-L组和Met-H组大鼠HOMA-IR明显高2结果于NC组,分别是NC组的1.85倍、1.35倍和1.31倍。Met-L2.1各组间糖脂代谢相关指标的比较组和Met-H组与DM组相比,HOMA-IR显著下降低(P
